貓α干擾素（IFN-α）ELISA試劑盒

Felis Interferon α,IFN-α ELISA Kit

包裝：96T/48T
檢測(cè)標(biāo)本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
保存：2-8℃，一年。

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貓α干擾素（IFN-α）ELISA試劑盒 供應(yīng)商：

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相關(guān)知識(shí)>>>>>>>
操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9． 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
血漿：
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 （ 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2） 混合10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形 成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí)，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀 釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻 漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 pg/ml （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 pg/ml （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 pg/ml （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 pg/ml （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml （空白對(duì)照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的 成份時(shí)，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀 釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻 漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細(xì)收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。