細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

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公司細胞現(xiàn)貨供應，質量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。公司產品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

B2M Others Cynomolgus 食蟹猴 B2M / Beta-2-microglobulin 人細胞裂解液 (陽性對照) Esculinsesquihydrate馬栗樹皮苷1克AR，98%

大鼠腎成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL克羅米通 CrotcMiton 483-63-6

AE-2雜交瘤細胞抗AChE AE-2 hybridoma cells against AChE DMEM+10% Hyclone 滅活血清8-羥基shēng huà shì jì容量：RT250毫升

WISP1 Protein Human 重組人 CCN4 / WISP1 蛋白 (His 標簽)脂多糖，英文名或英文縮寫：LPS，級別：高，98%，規(guī)格：500U

Hela S3(人細胞) 5×106cells/瓶×2 角質細胞培養(yǎng)基KM-acf2’-Deoxy-D-Ribose 1g原裝/5g原裝/10g原裝 INALCO1521/31
HBEGF Protein Human 重組人 HBEGF / D 蛋白雙(亞甲基二硫代)四硫富瓦1[有機電子材料]Bis(methylenedithio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]質量規(guī)格：

TE-13(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 心肌成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)雙(三亞甲基二硫代)四硫富瓦1[有機電子材料]Bis(trimethylenedithio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]質量規(guī)格：>97.0%(HPLC)

小鼠垂體瘤細胞;GT1-1四硫富瓦1(>98.0%(GC))Tetrathiafulvalene質量規(guī)格：>98.0%(GC)

人表皮微血管內皮細胞(HDMEC)( 5×105 )四(甲硫代)四硫富瓦1[有機電子材料]Tetrakis(methylthio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]質量規(guī)格：>98.0%(T)

Raji，人Butt's瘤細胞四(十八烷基硫代)四硫富瓦1[有機電子材料]Tetrakis(octadecylthio)tetrathiafulvalene [Organic Electronic Material]質量規(guī)格：>98.0%(T)
小鼠肺泡巨噬細胞ANGPTL5 Protein Human 重組人 ANGPTL5 蛋白 (GST 標簽)山梨酸Sorbic acid質量規(guī)格：AR,99%

Li-7(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 SARS Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) DL-丙氨酰-DL-正纈氨酸DL-Alanyl-DL-norvaline質量規(guī)格：0.99

牛腎細胞;MDBK3-(1-萘基)-L-丙氨酸3-(1-Naphthyl)-L-alanine質量規(guī)格：>98%,BR

LILRB2 Others Human 人 LILRB2 / ILT4 / LIR-2 人細胞裂解液 (陽性對照) Fmoc-3-(2-萘基）-D-丙氨酸Fmoc-3-(2-Naphthyl)-D-alanine質量規(guī)格：0.98

腎系膜細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)L-瓜氨酸L-Citrulline 質量規(guī)格：>99%,BR
細胞接受后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得聯(lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。
5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，