Bradford Protein Quantification Kit
Bradford蛋白濃度測定試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Bradford蛋白濃度測定試劑盒 | MP1903-500T | 500T | 135 |
Bradford蛋白濃度測定試劑盒 | MP1903-1000T | 1000T | 190 |
Bradford蛋白濃度測定試劑盒 | MP1903-2500T | 2500T | 410 |
產(chǎn)品描述
目前，的蛋白濃度檢測方法是：BCA蛋白定量試劑盒（BCA Protein Assay Kit）和Bradford蛋白定量試劑盒（Bradford Protein Assay Kit）。與蛋白濃度測定的其他方法（比如：BCA法和Lowry法）相比，Bradford法更簡單、更穩(wěn)定、兼容性更好。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，尤其是還原劑的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M，DTT的濃度可高達(dá)5mM，但本法受高濃度去垢劑的影響明顯，需確保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。含高濃度去污劑的蛋白定量，建議采用BCA蛋白定量試劑盒（MP1902-500T）。
本Bradford蛋白定量試劑盒（Bradford Protein Assay Kit）的檢測原理是：在酸性乙醇溶液中，考馬斯亮藍(lán)G250（Coommassie Brilliant Blue G250）與蛋白結(jié)合顏色由棕色變?yōu)樗{(lán)色，溶液的吸收峰從465nm遷移到595nm，顏色的變化與蛋白濃度成正比，因此，可通過檢測595nm處的吸光度對溶液中蛋白濃度進行測定。本試劑盒檢測速度很快，少量樣品一般只需10min即可完成檢測，檢測濃度下限達(dá)到25μg/ml，最小檢測蛋白量達(dá)到0.5μg，待測樣品體積為1～20μl，在50~1000 μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
產(chǎn)品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產(chǎn)品貨號（規(guī)格） | 儲存方法 | ||
MP1903-500T | MP1903-1000T | MP1903-2500T | |||
MP1903-A | G250染色液 | 100ml | 200ml | 500ml | 室溫 |
MP1903-B | 蛋白標(biāo)準(zhǔn)BSA | 20mg | 20mg | 20mg | 室溫 |
MP1903-C | 蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液 | 5ml | 10ml | 10ml | 室溫 |
保存與運輸方法
保存：室溫保存，1年有效。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)置于-20℃保存。
運輸：室溫運輸。
自備材料
1. 酶標(biāo)儀或分光光度計、96孔板或比色杯、離心機、離心管
2. 蒸餾水、0.9% NaCl或PBS
使用方法
1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備
1.1 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到20mg蛋白標(biāo)準(zhǔn)BSA中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃長期保存。
1.2 取適量20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5mg/ml或所需濃度。例如取25μl 20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入975μl稀釋液，充分混勻，即可配制成0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)?！咎貏e提示】：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中。但為了簡便起見，一般也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以-20℃長期保存。
2. 蛋白濃度的測定
2.1 將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補足至20μl，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。
2.2 加適當(dāng)體積樣品到96孔板或EP管中。如果樣品不足20μl，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補足到20μl，需注意記錄樣品體積。
2.3 各孔加入200μlG250染色液，室溫放置3~5min。
2.4 酶標(biāo)儀或分光光度計測定595nm波長處的吸光度（OD值），如無595nm，560～610nm波長范圍的吸光度也可。
2.5 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度（減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即最終的讀數(shù)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用樣品體積計算樣品的蛋白濃度。
注意事項
1） G250染色液回復(fù)至室溫充分混勻后使用，有利于提高檢測的靈敏度，加完G250染色液后，盡量在30min內(nèi)完成吸光度的測定，防止沉淀形成后影響實驗結(jié)果。
2） 蛋白標(biāo)準(zhǔn)在全部溶解后先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。
3） 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否則待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。
4） 建議每次測定都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因為測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5） 如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色杯的最小檢測體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大G250染色液、樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量使總體積不小于最小檢測體積，使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。
6） 用比色杯測定蛋白含量時，由于考馬斯亮藍(lán)易結(jié)合石英比色杯，應(yīng)優(yōu)先選用一次性塑料比色杯，如用玻璃比色杯，比色完畢后應(yīng)立即用乙醇清洗干凈。
7） 試劑開封后請盡快使用，以防影響后續(xù)實驗效果。
8） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
Bradford蛋白濃度測定試劑盒
Bradford蛋白濃度測定試劑盒
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