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PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

 PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號(hào)來定量樣品中DNA含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細(xì)胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，高度敏感。

技術(shù)背景

作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)。PicoGreen技術(shù)可以檢測到低達(dá)0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號(hào)強(qiáng)度（Intensity）或相對(duì)熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發(fā)熒光（Autofluorescence）忽略不計(jì)，重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差異（Standard Deviation）低，不受樣品化學(xué)成分的干擾。

產(chǎn)品內(nèi)容

染色液（Reagent A）       62.5微升

稀釋液（Reagent B）       15 毫升

標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）            1毫升

產(chǎn)品說明書                 1份

保存方式

保存染色液（Reagent A）和標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板：用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于熒光定量分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 測定準(zhǔn)備

• 準(zhǔn)備好待測樣品，置于冰槽里
• 設(shè)定好熒光分光光度儀（溫度為37℃）：激發(fā)波長480nm，散發(fā)波長530nm，并置零 
• 實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀釋液（Reagent B）到新的15毫升離心管，加入25微升染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標(biāo)記為染色工作液，放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。

• 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線

• 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管
• 分別加入500微升稀釋液（Reagent B）到每個(gè)離心管
• 移取500微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到1號(hào)管，混勻
• 小心移取500微升1號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到2號(hào)管，混勻
• 小心移取500微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到3號(hào)管，混勻
• 小心移取500微升3號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent C）到4號(hào)管，混勻
• 將1至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用；標(biāo)準(zhǔn)管含量見下表

• 移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
• 加入500微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液
• 室溫下，孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進(jìn)熒光分光光度儀測讀：獲得相對(duì)熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟8至11四次
• 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為相對(duì)熒光單位（RLU）；橫坐標(biāo)（X軸）為DNA含量（微克）

• 樣品檢測

• 移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
• 加入500微升待測樣品
• 室溫下，孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進(jìn)熒光分光光度儀測讀：獲得相對(duì)熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
• 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)DNA含量（微克）
• 樣品實(shí)際DNA濃度：

[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)DNA含量（微克）X樣品稀釋倍數(shù)]0.5（樣品容量；毫升）=微克/毫升

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為20次（比色皿）和100次（96孔板）操作，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線測定
• 操作時(shí)，須戴手套
• 使用新鮮配制的染色工作液，務(wù)必不要超過2小時(shí)，且注意避光
• 建議使用塑料管配制染色工作液，而不是玻璃制品
• 孵育時(shí)，避免光照
• 系統(tǒng)檢測，標(biāo)準(zhǔn)曲線測定1次即可；如果儀器更換，則需要重新測定1次
• 如果熒光讀數(shù)過高，可以相應(yīng)稀釋樣品量
• 可以使用熒光酶標(biāo)儀檢測，試劑用量和體系均除以5，包括標(biāo)準(zhǔn)DNA含量，其計(jì)算公式：

[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)DNA濃度（微克）X樣品稀釋倍數(shù)]÷0.1（樣品容量；毫升）＝微克/毫升

• 鹽類、尿素、乙醇、lv仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈DNA和RNA不會(huì)干擾檢測
• 本公司提供系列DNA檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

本產(chǎn)品經(jīng)鑒定高度敏感