小鼠層連蛋白實(shí)驗(yàn)原理:
1 抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性
2 抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性
3 酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
小鼠層連蛋白操作步驟:
1.將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原,洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
2.加稀釋的樣本,保溫反應(yīng)。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
3.加酶標(biāo)抗抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗抗體結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。
4.加底物顯色。
六大特點(diǎn):
1.簡易:以簡單的一步反應(yīng)取代常規(guī)法的五個(gè)步驟。
2.快捷:以1個(gè)小時(shí)取代常規(guī)法的3-5 個(gè)小時(shí)。
3.通用:適合于絕大多數(shù)一級抗體,而且不需要二級抗體反應(yīng)。
4.靈敏:具有與常規(guī)法相似的靈敏度。
5.重現(xiàn)性好:實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性好。
6.經(jīng)濟(jì):抗體和試劑可重復(fù)使用 4-5次。
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