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豐壽(上海)生物科技有限公司

胚胎干細胞培養(yǎng)方法

時間:2016-5-5閱讀:136
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干細胞因它們能夠分化為一系列成熟細胞類型而聞名,但是它們不能獨立維持這種可塑性。在體內(nèi),相鄰的細胞有助于維持干細胞的這種“多能性”狀態(tài)。但是在體外培養(yǎng)這些細胞,科學家們不得不設計出多種特殊的技術。這對胚胎干細胞(ESC)和誘導性多能干細胞(iPSC)而言,尤其如此。為了保持它們的多能性,這些細胞通常在由“飼養(yǎng)細胞”組成的支持層的上面進行培養(yǎng)。
飼養(yǎng)細胞給干細胞提供有價值的生長因子,同時也使得體外培養(yǎng)復雜化,而且也可能產(chǎn)生污染---對臨床應用而言,這是一個特別嚴重的問題。找出飼養(yǎng)細胞關鍵特征的早期努力一直不符合標準。Ito說,“在固定有生長因子的基質(zhì)(substrate)上培養(yǎng)干細胞一直比較困難。飼養(yǎng)細胞提供一種復雜的微環(huán)境,但是這種微環(huán)境不能夠通過一種或幾種生長因子來替代。”
作為一種替代選擇,研究人員對飼養(yǎng)細胞層進行化學固定處理,這種處理殺死細胞,在物理上保存它們的完整性,同時維持它們的外部結構在很大程度上完好無損。這就產(chǎn)生堅實的細胞培養(yǎng)表面,而且這些表面保存著幾乎所有的通常與干細胞發(fā)生相互作用的特征。小鼠iPSC甚至在之前經(jīng)過甲醛或戊二醛固定的飼養(yǎng)細胞上大量培養(yǎng)之后仍然保持它們的多能性狀態(tài)。戊二醛固定是一種嚴苛的處理,然而Ito和同事們注意到戊二醛固定的細胞也提供一種*的基質(zhì),而且這種戊二醛固定的細胞層足夠堅實,能夠經(jīng)受沖洗和反復使用。
研究人員非常吃驚地發(fā)現(xiàn)以這種方式培養(yǎng)的小鼠iPSC幾乎與利用傳統(tǒng)方法培養(yǎng)的那些細胞沒有什么差別。Ito說,“人們認為飼養(yǎng)細胞分泌維持未分化干細胞生長的蛋白或其他化合物。但是固定的細胞失去了這種分泌能力,這就證明提供合適的接觸微環(huán)境對iPSC而言更加重要。”考慮到固定的細胞層非常堅固,他期待一旦這種方法在培養(yǎng)人iPSC上經(jīng)過驗證和*化后,它就可能在商業(yè)上提供一種活細胞培養(yǎng)工具。

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