人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-B齊一生物科技（上海）有限公司是一家專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)和銷(xiāo)售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司.齊一生物科技（上海）有限公司：.Web:www.qiyibio。。ｃｏｍ

人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-B細(xì)胞培養(yǎng)方法 
1、收到細(xì)胞，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞，如包裝完好，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況 ，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后，細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿(mǎn)瓶壁，就可以傳代了。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過(guò)5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁，見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái)，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀，有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。
6，貼壁細(xì)胞 ，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí)，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37度    5%CO2 培養(yǎng)
7.  收到細(xì)胞后，請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)離心收集細(xì)胞，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ，血清濃度還是在10％。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含：必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無(wú)機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素）、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素（P/S）溶液、FBS，適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用

一、細(xì)胞操作參考書(shū)
二、生長(zhǎng)特性：貼壁    懸浮
三、細(xì)胞生長(zhǎng)條件：
培養(yǎng)基                  90%              （GIBCO）
血清              10%  FBS（GIBCO）
溫度                       37℃
空氣條件      5% CO2，,95% AIR
生長(zhǎng)代數(shù)    P4
凍存條件    培養(yǎng)基70%、血清20%、DMSO10%
四、組成：
組份    規(guī)格
細(xì)胞一瓶    T25
細(xì)胞培養(yǎng)與操作說(shuō)明    1份
五、細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
1.如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)實(shí)驗(yàn)室，技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決
2.貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢：適當(dāng)提高血清濃度（zui高不能超過(guò)20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
3.生長(zhǎng)不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

六、細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）
1．吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml  0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?-2min）
2．鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散
3．取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4．注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
特別注意：（如使用公共實(shí)驗(yàn)室或初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）
1.收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間zui長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí)）
2.貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞放置培養(yǎng)箱孵育過(guò)夜到第二天再做消化傳代
如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并實(shí)驗(yàn)室
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA 試劑盒
小鼠ELISA 試劑盒
小鼠降鈣素(CT)ELISA 試劑盒
小鼠抗卵白蛋白特異性IgE (OVE-IsgE）ELISA 試劑盒
小鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒
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小鼠前列腺特異性抗原(PSA)ELISA 試劑盒
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小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 試劑盒
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小鼠白介素13(IL-13)ELISA 試劑盒
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小鼠致癌基因相關(guān)蛋白KCELISA 試劑盒
小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)素1(CT-1)ELISA 試劑盒
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小鼠角化細(xì)胞分泌因子ELISA 試劑盒
小鼠谷胱甘肽-過(guò)氧化物酶（GSH-PX）ELISA 試劑盒
小鼠表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA 試劑盒
小鼠肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)ELISA 試劑盒
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小鼠乳酸脫氫酶(LDH)ELISA 試劑盒 
小鼠白細(xì)胞介素35（IL-35）ELISA 試劑盒
小鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA 試劑盒
小鼠肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）ELISA 試劑盒
小鼠白細(xì)胞介素1β（IL-1β）ELISA 試劑盒
小鼠組胺(HIS)ELISA 試劑盒
小鼠堿性磷酸酶(ALP)ELISA 試劑盒 
小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒 
小鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA 試劑盒
小鼠增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）ELISA 試劑盒
小鼠酸性磷酸酶（ACP）ELISA 試劑盒
小鼠免疫球蛋白G2a(IgG2a)ELISA 試劑盒
小鼠免疫球蛋白G1IgG1)ELISA 試劑盒
小鼠5羥色胺(5-HT)ELISA 試劑盒
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小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA 試劑盒
小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA 試劑盒
小鼠α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒
小鼠誘導(dǎo)型NO合酶(iNOS）ELISA 試劑盒
小鼠3-硝基酪氨酸（3-NT）ELISA 試劑盒
小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA 試劑盒
小鼠白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA 試劑盒
小鼠IgG Fc片段(IgGFcγ)ELISA 試劑盒
小鼠仙臺(tái)病毒(Sendai)ELISA 試劑盒
小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA 試劑盒 
小鼠支原體ELISA 試劑盒
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小鼠鼠痘病毒（MPV）ELISA 試劑盒
小鼠鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH IgG）ELISA 試劑盒
小鼠鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH IgM）ELISA 試劑盒
小鼠前列腺素 E2(PGE2)ELISA 試劑盒
小鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA 試劑盒
小鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA 試劑盒
小鼠皮質(zhì)酮(CS)ELISA 試劑盒
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）ELISA 試劑盒
小鼠琥珀酸脫氫酶(SDH)ELISA 試劑盒
小鼠Na-K-ATP酶ELISA 試劑盒
小鼠細(xì)胞色素氧化酶(CC0)ELISA 試劑盒
小鼠Ca-ATP酶ELISA 試劑盒
2 x YT Agar-capsule 培養(yǎng)基
2 x YT Top Agar 培養(yǎng)基
2 x YT Top Agar-capsule 培養(yǎng)基

非酶多糖清除劑
固相RNase 清除劑
液相RNase 清除劑
非酶DNA清除劑
液相內(nèi)毒素清除劑
液相內(nèi)毒素清除劑
固相內(nèi)毒素清除劑
非酶RNA清除劑-1
非酶RNA清除劑-2
溴化乙錠清除液(溶液A)
溴化乙錠清除液(溶液B)
DNA UV 防護(hù)劑
血清白蛋白清除劑(溶液A)
血清白蛋白清除劑(溶液B)

Water-DEPC treate DEPC水
β-Sitosterol β-谷甾醇
ACES N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸
Acetaldehyde 40% solution 40%乙醛溶液
Acetaldehyde oxime 乙醛肟
Acetamide 乙酰胺
4-Acetamidobenzaldehyde 4-乙酰氨基苯甲醛
Acetamidophenol 4-乙酰氨基酚
Acetovanillone 香草酮
Acetosyringone 乙酰丁香酮
4-Acetylbenzoic acid 4-乙?；郊姿?br>Acetic Acid 乙酸
Brilliant yellow 燦爛黃
Ampicillin, sodium salt 氨芐青霉素鈉
Acetic Acid 乙酸
Acetoacetaniline 乙?；阴１桨?br>1-Acetonaphthone 1-萘乙酮
2-Acetonaphthone 2-萘乙酮
Acetonitrile 乙腈
3-(α-Acetonylbenzyl)-4-hydroxycoumarin, sodium salt 鈉
Acetone oxime 丙酮肟
N-Acetyl-DL-alanine N-乙酰-DL-