大腸桿菌轉化可以:(1)將重組DNA分子導入大腸桿菌受體細胞進行復制,增殖和表達,以獲得目的基因;(2)驗證大腸桿菌感受態(tài)細胞效果;(3)用于分子生物學其他研究。
實驗材料 大腸桿菌
試劑、試劑盒 CaCl2氨芐*LB
儀器、耗材 離心機分光光度計搖床
實驗步驟
1. 接種—個單菌落于50 ml LB培養(yǎng)液中,于37℃搖床培養(yǎng)(250 r/min)。
2. 往一個2 L 的燒瓶中加入400 ml LB培養(yǎng)液,再加入4 ml 培養(yǎng)液,于37℃;搖床,培養(yǎng)至OD590為0.375。
3. 將培養(yǎng)液分裝到8個50 ml 預冷無菌的聚丙烯管中,于冰上放置5~10 min,然后于4℃,1 600 g 離心7 min。
4. 細胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl2“溶液重懸,于4℃,以1 100 g 離心5 min 。
5. 細胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl2溶液重懸,冰上放置30 min,于4℃,1 100 g 離心5 min。
6. 用2 ml 冰冷的CaCl2溶液重懸各管細胞,然后按每管250 μl 的量分裝于預冷的無菌聚丙烯管中,立即凍存于- 70℃。
7. 按照以下各步驟用10 ng pBR322轉化100 μl 感受態(tài)細菌。
8. 將合適體積的轉化物涂于含有氨芐*的LB平板上,37℃培養(yǎng)。
9. 將10 ng 加入到一個15 ml 無菌的圓底試管中,并放置冰上。
10. 將盛有感受態(tài)細胞菌的管子握在手上使菌液迅速熔化。
11. 立即將100 μl 感受態(tài)細菌加 入到管中,輕輕旋動,并放置冰上10 min 。
12. 將管故入42℃水浴2 min 進行熱休克,然后加入1 ml LB 培養(yǎng)液于每一支試管中。
13. 于37℃置滾筒式搖床口培養(yǎng)1 h。
14. 將幾個稀釋度菌液涂布于含合適抗生素的平板上,于37℃培養(yǎng)12~16 h。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業(yè)負責,環(huán)保在線對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。