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北京冬歌博業(yè)生物科技有限公司

主要經(jīng)營:elisa試劑盒,進口試劑,進口血清,進口細胞因子等;

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北京現(xiàn)貨人肝癌細胞/*耐藥株科研

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  • 北京冬歌博業(yè)生物科技有限公司
  • 2018-05-05 09:30:29
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【簡單介紹】

我司主要經(jīng)營細胞株、品牌試劑代理、抗體定制、進口試劑盒、多肽定制、實驗技術(shù)服務(wù)、各種實驗器材、實驗耗材器皿等。

【詳細說明】

人肝癌細胞/*耐藥株科研

保存:4℃保存一年,-20℃*保存
用途:可用于科研實驗培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。

歡迎或索取原版說明書.Q:2507862940 :/

人肝癌細胞/*耐藥株科研

培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。

 2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
     1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;

    1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml *,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。


注意事項:
1. 收到細胞后先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng),隔天再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常,請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細胞無活力,請拍下照片及時和我們,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
5. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通交流。
6. 該細胞只能用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。

    
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