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體外培養(yǎng)的細(xì)胞按照生長(zhǎng)方式分為兩種:貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。
(1)貼壁細(xì)胞
細(xì)胞沿著培養(yǎng)容器的支撐面生長(zhǎng),細(xì)胞首先鋪滿(mǎn)容器,如果繼續(xù)生長(zhǎng),部分細(xì)胞以*層細(xì)胞為支撐繼續(xù)生長(zhǎng),體外培養(yǎng)的大部分細(xì)胞屬于貼壁細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)大致分為下面4種類(lèi)型:
①成纖維細(xì)胞:是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞(mesenchymalcell)分化而來(lái),數(shù)目zui多,細(xì)胞大,多為突起的紡錘形或星形的扁平細(xì)胞,細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,胞質(zhì)突起,生長(zhǎng)時(shí)呈放射狀。除真正的成纖維細(xì)胞外,凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織,如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀態(tài)。另外,凡培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維類(lèi)似時(shí)也可稱(chēng)之為成纖維細(xì)胞。
②上皮細(xì)胞:位于皮膚或腔道表層的細(xì)胞,細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多角形,*有圓形核,細(xì)胞彼此緊密相連成單層膜。生長(zhǎng)時(shí)呈膜狀移動(dòng),處于膜邊緣的細(xì)胞總與膜相連,很少單獨(dú)行動(dòng)。起源于內(nèi)、外胚層的細(xì)胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態(tài);
③游走細(xì)胞:能夠在組織內(nèi)自由移動(dòng)的細(xì)胞,呈散在生長(zhǎng),一般不連成片,胞質(zhì)常突起,呈活躍游走或變形運(yùn)動(dòng),方向不規(guī)則。如哺乳動(dòng)物的小淋巴細(xì)胞、嗜中性白血細(xì)胞等。
④多形細(xì)胞型:難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)的細(xì)胞,如神經(jīng)細(xì)胞、多形T細(xì)胞等。
(2)懸浮細(xì)胞
細(xì)胞分散在培養(yǎng)液中,呈懸浮生長(zhǎng),一般成圓形,這類(lèi)細(xì)胞容易大量繁殖,如某些類(lèi)型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。
1)其他細(xì)胞分離技術(shù)
(1)熒光分離技術(shù)
熒光分離技術(shù)也稱(chēng)為熒光激活分選法,它首先對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光染色,標(biāo)記上特定的熒光,然后將細(xì)胞懸液稀釋到一定濃度,保證細(xì)胞可以單個(gè)通過(guò)檢測(cè)器,當(dāng)有光信號(hào)打到細(xì)胞表面時(shí),檢測(cè)散射光,按照設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)將細(xì)胞分流到不同的收集管。這種分離方法需要借助熒光激活的*(如流式細(xì)胞儀)來(lái)完成。
(2)電泳分離技術(shù)
在一定PH值下細(xì)胞表面帶有凈的正或負(fù)電荷,能在外加電場(chǎng)的作用下發(fā)生泳動(dòng),這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞電泳(cell electrophoresis)。各種細(xì)胞或處于不同生理狀態(tài)的同種細(xì)胞電荷量有所不同,因而在一定的電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度不同,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分離的目的。
3)常用于組織消化的酶種類(lèi)
(1)*
從牛、羊或豬的胰臟中提取的一種蛋白水解酶,它能從多肽鏈中的賴(lài)氨酸和*殘基中的羧基側(cè)。*通過(guò)水解黏結(jié)相鄰細(xì)胞的糖蛋白,從而使細(xì)胞之間分離。根據(jù)提取純度的不同,蛋白酶分為精制和粗制*,粗制*因含有其他蛋白酶,所以比精制*分離細(xì)胞的活性好,但雜蛋白酶可能導(dǎo)致粗制*的毒性要比精制的高。
(2)膠原酶
能特異性地降解胞外膠原蛋白,使膠原蛋白和纖維粘連蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)解離,而不損壞細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)的完整性。商業(yè)化的膠原酶產(chǎn)品一般是梭狀芽孢桿菌裂解液的粗提物,是膠原酶、*等蛋白水解酶混合物,能降解膠原蛋白和其他蛋白,及多糖等胞外大分子物質(zhì),適用于多種組織的消化應(yīng)用。
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