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整合型酵母載體
整合型酵母質(zhì)粒(YIp)是細菌質(zhì)粒含有一個酵母基因。如YIp5,是在pBR32的基礎(chǔ)上插入了一個URA3基因,這個基因編碼乳清酸核苷 5′磷酸脫羧酶,是嘧啶合成中的一個酶,可以作為選擇標記,選擇的方法與LEU2標記相同,YIp不能像質(zhì)粒一樣復(fù)制,其復(fù)制依賴于整合到酵母的染色體上,整合的機制與YEp相同。ELISA試劑盒
復(fù)制型酵母載體
復(fù)制型酵母質(zhì)粒(YRp)含有一段包括起始位點在內(nèi)的染色體DNA,可以作為獨立質(zhì)粒進行復(fù)制。復(fù)制起始位點與多個酵母基因距離很近,包括作為選擇標記的基因。為這種載體提供復(fù)制起點的是2μmDNA環(huán)或自主復(fù)制序列(autonomouslyreplicatingsequence,ARS)。YRp7是其中的一種,它由pBR322與酵母基因TRP1組成,TRP1參與*的合成,它與起始位點的距離非常近,插入YRp7的酵母DNA片段包括TRP1和復(fù)制起始位點。在一個特定的克隆實驗中選用哪一種類型的質(zhì)粒需要考慮三個因素。ELISA試劑盒
(1)轉(zhuǎn)化頻率也就是每微克的質(zhì)粒DNA可以獲得轉(zhuǎn)化子的數(shù)目。YEp的轉(zhuǎn)化頻率zui高,每微克DNA可以獲得10000~100000個轉(zhuǎn)化細胞;YRp次之,可以產(chǎn)生1000~10000個轉(zhuǎn)化細胞;YIp產(chǎn)量較低,一般少于1000個,如果不是用特殊的程序,只能產(chǎn)生1~10個重組子。較低的轉(zhuǎn)化效率意味著與染色體之間的重組是非常少的。
(2)拷貝數(shù)YEp和YRp含有的拷貝數(shù)zui多,每個細胞中含有20~50和5~100個,而YIp一般只以單個拷貝存在于細胞中。如果要從克隆的基因中獲得蛋白,這些特性就非常重要,因為拷貝數(shù)越多,蛋白質(zhì)的產(chǎn)量就越高。
(3)穩(wěn)定性YIp能產(chǎn)生穩(wěn)定的重組子。而YRp重組子是非常不穩(wěn)定的,母細胞中聚集大量的重組分子,但在子代中就可能丟失。YEp也有同樣的問題。ELISA試劑盒
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