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訪問次數(shù):1034更新時間:2018-02-09 09:56:01
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規(guī)格: 96T
樣本類型: serum, plasma, tissue homogenates
所需樣本體積: 50-100ul
檢測波長: 450 nm
反應時間: 1-5h
庫存:現(xiàn)貨
保質期:6個月
運輸:快遞(根據(jù)客戶要求,選擇具體的運輸方式)
用途: 科研實驗等領域
馬生長激素(GH)ELISA試劑盒實驗思路
在實驗的可驗證性中,現(xiàn)代科研的基本模式是假說驅動的,無法驗證的假說難以進入科研活動過程,當然從大的歷史條件下,如果只是因為技術上的困難而無法實現(xiàn)的假說另當別論。但是即使是這樣,假說也必須具有理論上的可驗證性。在科學發(fā)展的相對低級階段,可驗證性更為必要,尤其是作為普通科研人員,沒有可驗證性的思路往往難以產生發(fā)展的動力,更不要說有效的推廣和應用。
在ELISA試劑盒實驗思路中,具體正確性也需要更多研究來驗證的。而ELISA實驗的技巧、經驗、步驟方法等可驗證性也是非常重要的,我公司在日后的售后技術指導中也不會松懈,繼續(xù)保持!技術指導服務的完善對產品負責、對客戶負責。
馬生長激素(GH)ELISA試劑盒問題解析
設計ELISA復孔檢查時,是對同一個樣品作兩次稀釋,再分別加到板上的兩個孔,還是只稀釋一次,然后吸取兩次分別加到兩個孔?前者似乎把稀釋時的誤差也考慮到了,但做出來的結果兩個孔相關挺大的。而較常使用的是哪種稀釋方法?
為了減小誤差,是先稀釋再加樣。而針對這位客戶所遇到的疑問,我公司技術人員是這樣解說的:
1. 前者測的是稀釋和移液的誤差,后者只有移液誤差。
2. 一般都是稀釋一次,分兩孔吧。同濃度的分復孔。
3. 由于是從同一原液稀釋,一般不考慮稀釋誤差(稀釋誤差是存在的),都是稀釋到想要的倍數(shù)直接分孔(而不是一一稀釋,這樣可以使稀釋誤差減小)。
4. 復孔是為了排除移液體積,板的影響,以及其他系統(tǒng)誤差的,要求復孔的濃度是*的。稀釋后分孔能滿足此要求,一一稀釋不能。
說明:
1.檢測原理:采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
2.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)。
3.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
4.中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。
5.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結果造成任何影響。
實驗注明:
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。更多詳情請關注我司:www.shjmsw。。com
3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請精確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
結果處理
1.ELISA實驗中樣品都要做復孔或三孔,然后計算每個濃度標準品的平均OD值,復孔的變異系數(shù)應該小于20%。
2.平均OD值減去空白孔的OD值。
3.制作標準曲線。
以減去本底后的OD值為X軸,標準品的濃度為Y軸,利用作圖軟件得出一個合適的計算方法。建議使用合適的軟件來作圖,比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗某條曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合,可以將標準品的濃度作為未知數(shù),將對應的OD值帶入該方程,計算出標準品的濃度,得到的結果應該與實際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度zui高的那條曲線。