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當(dāng)前位置:上海通蔚生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>減少ELISA實(shí)驗(yàn)誤差需注意哪些
在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中,誤差分有系統(tǒng)誤差、偶然誤差、過失誤差,而一個(gè)小小的誤差主意能夠影響到實(shí)驗(yàn),那么怎樣才能縮小實(shí)驗(yàn)誤差呢?
ELISA試劑盒注意的地方
1. 檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。
2. 使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要。
3. 仔細(xì)閱讀說明書,嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。
4. 洗滌che底,如若洗板不che底,酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。
5. 嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)時(shí)間過長,酶失活;反應(yīng)時(shí)間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。
6. 注意試劑盒保存期,過保存期的試劑不能使用。
7. 評(píng)估試劑的實(shí)用性,試劑的穩(wěn)定與否,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用。
8. 嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間,顯色時(shí)間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。
9. 加樣要準(zhǔn)確、快速。如果加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時(shí)間暴露在外,尤其室溫過高時(shí),保存期會(huì)縮短甚至失效。
以上是減少ELISA實(shí)驗(yàn)誤差需注意哪些.上海通蔚生物公司主營的產(chǎn)品有elisa試劑盒、生化試劑盒、抗體、重組蛋白、標(biāo)準(zhǔn)品、對照品、培養(yǎng)基、血清、酶、實(shí)驗(yàn)耗材、進(jìn)口試劑及實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)等。提供各種抗體、免疫學(xué)相關(guān)的檢測試劑盒、胎牛血清,動(dòng)物抗血清等高品質(zhì)產(chǎn)品及服務(wù),涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)范疇。完善的庫存及供給體系以及高效安穩(wěn)的技術(shù)指導(dǎo),保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供給。
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