PKH67細胞增殖與毒性檢測試劑盒

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商品介紹：

熒光染料PKH67 是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料，可以標記活體細胞，通過與膜結構的脂質分子結合而標記細胞。對細胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，有著強而穩(wěn)定的綠色熒光。經PKH67標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。

在細胞分裂增殖過程中，PKH67的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據這一特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。PKH67標記細胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，PKH67標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半，通過流式細胞儀根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次(1/2的熒光強度)，二次(1/4的熒光強度)，三次(1/8的熒光強度)，以及更多分裂次數的細胞。PKH67可檢測分裂次數多達六次甚至更多。

除了用于細胞增殖檢測，PKH67 還可以用于細胞的體外盒體內示蹤，標記后熒光在胞內表達穩(wěn)定，陽性標記率達98%以上，標記細胞形態(tài)良好，能有效地觀察細胞在體外的誘導分化情況；或將標記的細胞注入體內，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。

PKH67標記的細胞用于體內觀察可以長達數周之久，它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗。PKH67 毒性較小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖?，更準確和更安全地得到想要的實驗數據。

PKH67標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。

PKH67標記細胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=490 nm,λem=502 nm。

儲存條件：-20℃避光保存。

步驟和注意事項：?

準備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

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