檢測范圍:15.6 pg/ml - 1,000 pg/ml
特 異 性:本試劑盒可同時檢測重組或天然的,且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)
人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100 ,注意不要有氣泡,加樣 時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37 溫育2小時。為保證實驗結(jié)果有效
2、 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100 (臨用前配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37 溫育1小時。
3、 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400 /每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4、 每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100 ,加上覆膜,37 溫育1小時。
5、 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90 ,酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色(反應(yīng)時間控制在15-30分鐘,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。
7、 每孔加終止溶液50 ,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物 液的加入順序相同。
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。
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