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HFL-I細胞,人胚肺成纖維細胞注意事項

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更新時間：2017-11-03 10:36:18瀏覽次數(shù)：225次

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上海研盟生物科技有限公司

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產品簡介

上海研盟生物提供美國ATCC傳代細胞株“HFL-I細胞,人胚肺成纖維細胞注意事項"，進口來源，國內保種，活性保證，咨詢：.

詳細介紹

【友情提示】：產品價格與說明書請?zhí)砑涌头騺黼娫儍r，索要說明書；

產品名稱：HFL-I細胞,人胚肺成纖維細胞注意事項

細胞特性

動物種別：人

組織來源：胚胎；肺

形態(tài)：成纖維細胞樣

培養(yǎng)基和添加劑：MEMα+培養(yǎng)基(GIBCO,貨號11900024，添加NaHCO3 1.5g/L，肌醇 43.2mg/L, * 8.82mg/L,β-巰基乙醇 7.8mg/L)，90%；胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

REFERENCE：Mizuta K, Abiko C, Goto H, Murata T, Murayama S. Int J Infect Dis 2003; 7:138-142. PubMed ID: 12839716 Matsui S, Matsumoto H, Sonoda Y, Ando K, Aizu-Yokota E, Sato T, Kasahara T. Int Immunopharmacol 2004; 15:1633-1644.PubMed ID: 15454116 Zhejiang Med 24(10):586-588,2002 MOLECULAR THERAPY 11(4):531,2005

含量：>1x10的6次方個/mL
污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

基本特性：
描述：（1）所有細胞株購自ATCC；
（2）公司可提供新鮮或凍存細胞株；
（3）細胞株數(shù)量約 1000000個/瓶；
（4）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復溫后2個小時需要立即傳代，提供復蘇好的細胞株，貼壁及懸浮細胞形式，細胞狀態(tài)良好，飽滿、光澤度好，*，并提供細胞報價、所需培養(yǎng)基、種屬來源、組織來源、形態(tài)、背景資料等。

復蘇細胞注意事項：
1收到細胞后當天換液，全部更換成客戶自己的新鮮培養(yǎng)基，放進培養(yǎng)箱，第二天再消化。
2邊觀察邊消化，根據(jù)細胞的形態(tài)，終止消化時間，采取以半分鐘間隔吹打細胞邊緣，如可吹打下來，即終止消化?？蛻裘鞅容^好的消化時間。
3隨細胞有一份細胞操作說明書，請客戶仔細查看。
4記得加1%雙抗，降低被污染的概率。另外盡早凍存留種，以備后用。
5售后時間為一周，*于細胞本身的質量問題，而因乙方自己不當操作（不規(guī)范操作，消化過度，不加雙抗導致的污染等）導致的細胞問題不在售后范疇。
6收到細胞后，如細胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當天盡快，以便處理。當天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請您務必重視。
7剛收到細胞時，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細胞盡快恢復狀態(tài)，細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，再調回10%即可。
（其中1,2條針對于貼壁細胞，懸浮細胞詳情請見細胞操作說明書）

細胞用途：僅供科研使用。

HFL-I細胞,人胚肺成纖維細胞注意事項復蘇方法

1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。

3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養(yǎng)液，吹打使細胞懸浮。

4．低速離心（500～1000轉/分）5分鐘，取上清后再重復用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5．加入培養(yǎng)液適當稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

我公司認為購買細胞的客戶有培養(yǎng)細胞的經(jīng)驗，客戶收到細胞，原瓶里的培養(yǎng)液可以收集繼續(xù)使用，在*次消化傳瓶時，我們要求客戶留一瓶細胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液，其它瓶的細胞客戶可使用自己的培養(yǎng)液，這樣可減少由于細胞不適應培養(yǎng)液導致的細胞問題。

來源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。每管含有細胞數(shù)>1000000個，具有高品質、高純度、高穩(wěn)定性等特點，純化技術保證產品性能。
運輸方式：活細胞運輸（T-25 flasks）。
細胞純度：95%。
細胞來源：ATCC等。
包裝：內層無菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說明書。

用途：本產品只提供給進一步的科研使用，不可應用于治療等其他方面。

細胞凍存
１．將細胞消化下來，移入離心管離心，棄上清
２．準備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內．
放入－２０度冰箱２－４小時后．再放入－８０度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存.

，體內、外細胞的差異和分化：

1、差異：細胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調節(jié)和細胞間的相互影響，生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境，日久天長，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡；或發(fā)生轉化獲得不死性，變成可無限生長的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。因此，培養(yǎng)中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能，也有一些不同于體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開始發(fā)生了。

2、分化：體外培養(yǎng)的細胞分化能力并未*喪失，只是環(huán)境的改變，細胞分化的表現(xiàn)和在體內不同。細胞是否表現(xiàn)分化,關鍵在于是否存在使細胞分化的條件，如Friend細胞（小鼠紅白血病細胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白，血管內皮細胞在類似基膜物質底物上培養(yǎng)時能長成血管狀結構，雜交瘤細胞能產生特異的單克隆抗體，這些均屬于細胞分化行為。

注意事項

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

傳代時間：2-3天 3-5天

傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2

細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細胞實驗安全性：所有細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

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