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NCI-H358細(xì)胞,人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

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上海研盟生物科技有限公司

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上海研盟生物提供美國(guó)ATCC傳代細(xì)胞株“NCI-H358細(xì)胞,人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞"，進(jìn)口來(lái)源，國(guó)內(nèi)保種，活性保證，咨詢(xún)：.

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產(chǎn)品名稱(chēng)：NCI-H358細(xì)胞,人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

細(xì)胞特性

組織來(lái)源：細(xì)支氣管及肺泡癌
培養(yǎng)條件：RPMI-1640 +10% FBS
形態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣
背景：1981年從一位開(kāi)始*之前的患者的腫瘤組織中分離建株。超微結(jié)構(gòu)研究表明細(xì)胞質(zhì)中有Clara細(xì)胞的特征結(jié)構(gòu) 細(xì)胞表達(dá)主要的肺表面結(jié)合蛋白SP-A的蛋白和RNA。不表達(dá)SP-B和SP-C。在軟瓊脂中的克隆形成效率為0.83%。

含量：>1x10的6次方個(gè)/mL
污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

基本特性：
描述：（1）所有細(xì)胞株購(gòu)自ATCC；
（2）公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株；
（3）細(xì)胞株數(shù)量約 1000000個(gè)/瓶；
（4）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

密度超過(guò)90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí),則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代，提供復(fù)蘇好的細(xì)胞株，貼壁及懸浮細(xì)胞形式，細(xì)胞狀態(tài)良好，飽滿(mǎn)、光澤度好，*，并提供細(xì)胞報(bào)價(jià)、所需培養(yǎng)基、種屬來(lái)源、組織來(lái)源、形態(tài)、背景資料等。

細(xì)胞描述：1981年從一位開(kāi)始*之前的患者的腫瘤組織中分離建株。超微結(jié)構(gòu)研究表明細(xì)胞質(zhì)中有Clara細(xì)胞的特征結(jié)構(gòu) 細(xì)胞表達(dá)主要的肺表面結(jié)合蛋白SP-A的蛋白和RNA。不表達(dá)SP-B和SP-C。他們?cè)谲洯傊械目寺⌒纬尚蕿?.83%。在本庫(kù)通過(guò)支原體檢測(cè)。在本庫(kù)通過(guò)STR檢測(cè)。
動(dòng)物種別：人
組織來(lái)源：細(xì)支氣管及肺泡癌;非小細(xì)胞肺癌;肺;細(xì)支氣管;肺泡
形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
培養(yǎng)基和添加劑：RPMI-1640(GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
REFERENCE：Tomlinson GE et al. Chaacterization of a breast cancer cell line derived from a germ-line BRCA1 mutation. Cancer Res. 58:3237-3242, 1998 PubMed: 98363228 Gazdar AF et al. Charaterization of paired tumor and non-tumor cell lines established from patients with breast cancer. Int. J. Cancer 78: 766-774, 1998 PubMed: 99049517 Hay, R. J., Caputo, J. L., and Macy, M. L., Eds. (1992), ATCC Quality Control Methods for Cell Lines. 2nd edition, Published by ATCC. Caputo, J. L., Biosafety procedures in cell culture. J. Tissue Culture Methods 11:223-227, 1988. Fleming, D.O., Richardson, J. H., Tulis, J.J. and Vesley, D., (1995) Laboratory Safety: Principles and Practice. Second edition, ASM press, Washington, DC. Centers for Disease Control (1993), Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Human Health Service Publication No. (CDC) 93-8395. U.S. Dept. of Health and Human Services; 3rd Edition U.S. Government Printing Office Washington D.C.

NCI-H358細(xì)胞,人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞復(fù)蘇方法細(xì)胞用途：僅供科研使用。

1．從液氮罐中取出安剖；有時(shí)因安剖未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng)，盡快解凍。

3．剪開(kāi)紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺(tái)上打開(kāi)蓋，用吸管吸出細(xì)胞懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞懸浮。

4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5．加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

我公司認(rèn)為購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞的客戶(hù)有培養(yǎng)細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)，客戶(hù)收到細(xì)胞，原瓶里的培養(yǎng)液可以收集繼續(xù)使用，在*次消化傳瓶時(shí)，我們要求客戶(hù)留一瓶細(xì)胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液，其它瓶的細(xì)胞客戶(hù)可使用自己的培養(yǎng)液，這樣可減少由于細(xì)胞不適應(yīng)培養(yǎng)液導(dǎo)致的細(xì)胞問(wèn)題。

來(lái)源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測(cè)試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。每管含有細(xì)胞數(shù)>1000000個(gè)，具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點(diǎn)，純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運(yùn)輸方式：活細(xì)胞運(yùn)輸（T-25 flasks）。
細(xì)胞純度：95%。
細(xì)胞來(lái)源：ATCC等。
包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說(shuō)明書(shū)。

用途：本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞凍存
１．將細(xì)胞消化下來(lái)，移入離心管離心，棄上清
２．準(zhǔn)備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細(xì)胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時(shí)后．再放入－８０度冰箱過(guò)夜，第二天放入液氮罐保存.

本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號(hào)11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

傳代時(shí)間：2-3天 3-5天

傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2

細(xì)胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)安全性：所有細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀(guān)察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

研盟生物其他優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品：

小鼠雜交瘤細(xì)胞，D61-18,IgA
小鼠雜交瘤細(xì)胞，19GD6
小鼠雜交瘤細(xì)胞，D10-G/u
小鼠雜交瘤細(xì)胞，16AC5
小鼠雜交瘤細(xì)胞，10EF10
小鼠雜交瘤細(xì)胞，D47-u
小鼠雜交瘤細(xì)胞，D10-1A/u
小鼠雜交瘤細(xì)胞，19DF10
小鼠雜交瘤細(xì)胞，D61-NEW
小鼠雜交瘤細(xì)胞，I41
小鼠雜交瘤細(xì)胞，D47-AF,IgA
小鼠雜交瘤細(xì)胞，16DC9-A
小鼠雜交瘤細(xì)胞，T33-22A
小鼠雜交瘤細(xì)胞，16CD11-G
小鼠雜交瘤細(xì)胞，16BB5
小鼠雜交瘤細(xì)胞，16CF7
小鼠雜交瘤細(xì)胞，16CD11-A
小鼠雜交瘤細(xì)胞，I41-AG
小鼠雜交瘤細(xì)胞，19HC5
小鼠雜交瘤細(xì)胞，16CF7-A5
小鼠雜交瘤細(xì)胞，4E-BP1
小鼠雜交瘤細(xì)胞，ABL2
小鼠雜交瘤細(xì)胞，Akt2
小鼠雜交瘤細(xì)胞，Akt3
小鼠雜交瘤細(xì)胞，AMACR
小鼠雜交瘤細(xì)胞，APOA1
小鼠雜交瘤細(xì)胞，APOA5
小鼠雜交瘤細(xì)胞，ApoM
小鼠雜交瘤細(xì)胞，APP
小鼠雜交瘤細(xì)胞，AURKB
小鼠雜交瘤細(xì)胞，BCL-10
小鼠雜交瘤細(xì)胞，BLK
小鼠雜交瘤細(xì)胞，BNP1