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RKO-E6人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞

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上海研盟生物科技有限公司

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

上海研盟生物提供美國(guó)ATCC傳代細(xì)胞株“RKO-E6人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞"，進(jìn)口來(lái)源，國(guó)內(nèi)保種，活性保證，咨詢(xún)：.

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產(chǎn)品名稱(chēng)：RKO-E6人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞

細(xì)胞特性

產(chǎn)品編號(hào)	名稱(chēng)	簡(jiǎn)稱(chēng)	規(guī)格	培養(yǎng)條件
YM-2230	RKO-E6；人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞	RKO-E6	1×10^6 cells/瓶	DMEM +10% FBS

細(xì)胞名稱(chēng)：RKO-E6 人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞
組織來(lái)源：結(jié)腸癌，轉(zhuǎn)染插入到pCMV中的HPV E6
培養(yǎng)條件：MEM +10% FBS
形　　態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣

基本特性：
描述：（1）所有細(xì)胞株購(gòu)自ATCC；
（2）公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株；
（3）細(xì)胞株數(shù)量約 1000000個(gè)/瓶；
（4）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

密度超過(guò)90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí),則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代，提供復(fù)蘇好的細(xì)胞株，貼壁及懸浮細(xì)胞形式，細(xì)胞狀態(tài)良好，飽滿(mǎn)、光澤度好，*，并提供細(xì)胞報(bào)價(jià)、所需培養(yǎng)基、種屬來(lái)源、組織來(lái)源、形態(tài)、背景資料等。

RKO-E6人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞復(fù)蘇方法細(xì)胞用途：僅供科研使用。

1．從液氮罐中取出安剖；有時(shí)因安剖未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng)，盡快解凍。

3．剪開(kāi)紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺(tái)上打開(kāi)蓋，用吸管吸出細(xì)胞懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞懸浮。

4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5．加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

我公司認(rèn)為購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞的客戶(hù)有培養(yǎng)細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)，客戶(hù)收到細(xì)胞，原瓶里的培養(yǎng)液可以收集繼續(xù)使用，在*次消化傳瓶時(shí)，我們要求客戶(hù)留一瓶細(xì)胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液，其它瓶的細(xì)胞客戶(hù)可使用自己的培養(yǎng)液，這樣可減少由于細(xì)胞不適應(yīng)培養(yǎng)液導(dǎo)致的細(xì)胞問(wèn)題。

來(lái)源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測(cè)試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。每管含有細(xì)胞數(shù)>1000000個(gè)，具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點(diǎn)，純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運(yùn)輸方式：活細(xì)胞運(yùn)輸（T-25 flasks）。
細(xì)胞純度：95%。
細(xì)胞來(lái)源：ATCC等。
包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說(shuō)明書(shū)。

用途：本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞凍存
１．將細(xì)胞消化下來(lái)，移入離心管離心，棄上清
２．準(zhǔn)備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細(xì)胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時(shí)后．再放入－８０度冰箱過(guò)夜，第二天放入液氮罐保存.

本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號(hào)11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

傳代時(shí)間：2-3天 3-5天

傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2

細(xì)胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)安全性：所有細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀(guān)察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

研盟生物其他優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品：

小鼠血細(xì)胞，WEHI-3
小鼠淋巴瘤細(xì)胞(NK靶細(xì)胞)，YAC-1
小鼠淋巴細(xì)胞白血病，L1210
小鼠淋巴瘤細(xì)胞，P388D1(IL-1)
小鼠淋巴瘤細(xì)胞，EL4
小鼠淋巴瘤細(xì)胞，EL4.IL-2
小鼠淋巴瘤細(xì)胞，P388D1
小鼠淋巴瘤細(xì)胞，L5178YTK+/-clone(3.7.2C)
小鼠T淋巴細(xì)胞，Cl.Ly1+2-/9
小鼠T淋巴瘤細(xì)胞，Cyc-Tag(S49)
小鼠T淋巴瘤細(xì)胞，E.G7-OVA
小鼠B淋巴細(xì)胞，WEHI 231
小鼠巨噬細(xì)胞，Ana-1
小鼠漿細(xì)胞瘤，MPC-11
小鼠單核巨噬細(xì)胞，J774A.1
小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞，RAW 264.7

細(xì)胞名稱(chēng)：
細(xì)胞描述：RKO-E6細(xì)胞系是用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pCMV-E6的結(jié)腸癌RKO細(xì)胞系。該細(xì)胞含有穩(wěn)定整合受控於巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子的人乳tou狀病毒（HPV）E6癌基因。 RKO-E6細(xì)胞系和它的母系RKO一起可用于研究p53缺失引起的細(xì)胞參數(shù)改變p53介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄和凋亡等。在本庫(kù)通過(guò)支原體檢測(cè)。在本庫(kù)通過(guò)STR檢測(cè)。
動(dòng)物種別：人
組織來(lái)源：結(jié)腸癌，轉(zhuǎn)染插入到pCMV中的HPV E6
形態(tài)：上皮細(xì)胞
培養(yǎng)基和添加劑：MEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)41500034，添加NaHCO3 1.5g/L，Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
REFERENCE：Oncogene 10: 1053-1059, 1995. PubMed: 7700629 Oncogene 13: 2255-2263, 1996. PubMed: 8950993 J. Biol. Chem. 272: 28989-28993, 1997. PubMed: 9360971

關(guān)鍵詞：培養(yǎng)箱顯微鏡

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