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上海莼試生物技術有限公司

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EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1022
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1022
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更新時間:2017-06-08 13:35:21瀏覽次數:397

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【簡單介紹】
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1022 ,采用干冰保存運輸收到細胞時,若干冰已經*融化,請立即將細胞復蘇培養(yǎng);若尚留有干冰,請立即將細胞放入液氮中保存待用,請按條件貯存細胞,切不可將細胞置于高溫環(huán)境。

細胞名稱  EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1022  
形態(tài)特性   淋巴母細胞樣  
生長特性  懸浮生長  
特征特性   該細胞系來源于一成年男性的外周血。2010年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉化的方法建立。   
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS  
傳代方法   1:2傳代;5-6天一次  
傳代情況  P3  
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS   
支原體檢測  熒光法(-)   
STR   -  
同工酶    
染色體    
使用權限  A類EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1022實驗方法和步驟
(一) 前處理 用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時后,將動物處死,用剪刀剪開皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨,用注射器(內裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細胞到離心管中,經平衡后離心8分鐘,速度為1000轉/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復固定1~2次,離心的速度與時間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預先冷凍的載片,每片滴3滴細胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細胞均勻分散,在酒精燈火焰上來回烤一下,以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉至高倍鏡詳細觀察兩棲類染色體的數目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項:
1.收到細胞后,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
清晰地判斷Western Blot的轉膜效果。SDS-PAGE凝膠電泳或轉移到PDF或NC膜上可得到清晰的10條彩色蛋白條帶,其中25kD為綠色條帶,75kD為紅色條帶,其余8條是藍色條帶。  
產品特點:  
三色預染,顏色鮮亮,條帶整齊,便于觀察。  
穩(wěn)定性能突出,檢測4℃放置兩年無明顯降解。  
用量少,節(jié)約成本,僅5ul即可*呈現(1.5mm,10孔梳)。  
廣譜多帶,一支即可滿足多種實驗需求。  
注意事項:   
1.本產品含有較高濃度甘油,常規(guī)-20℃保存為液體狀態(tài),可直接使用。若冰箱溫度不穩(wěn),導致結冰,可適當分裝后置于4℃保存,至少穩(wěn)定6個月。  
2.Marker分離效果與PAGE膠濃度相關,若分離膠濃度低于15%,25kD以下條帶不易分離,但不影響綠色(25KD)及以上條帶。如果目的條帶小于25KD,建議分離膠濃度大于或等于15%。  
3.轉膜效果與轉膜時間有關,需根據客戶目的條帶大小而定,如果轉膜后較大分子量條帶有部分未轉膜成功,屬于正?,F象。  
儲存條件:  
-20℃保存,有效期至少2年。  
中文名稱:預染彩虹蛋白marker (40-300 KD)  
英文名字:Prestained Protein Ladder  
產品簡介:  
本產品為三色預染蛋白分子量標準,由分子量從40 kDa到300 kDa的8種高純度預染蛋白質組成,其中70 kDa和300 kDa條帶為橙色,50 kDa條帶為綠色,其余條帶為藍色。  
本產品適合應用于SDS-PAGE時觀察蛋白電泳情況, Western Blot時判斷蛋白轉移效率,以及SDS-PAGE和Western Blot時的蛋白分子量標準。  
本產品以凝膠上樣緩沖液形式提供,緩沖液成分為:62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5),1mM EDTA,2%(w/) SDS,10mM DTT,1mM NaN3以及33%(/) glycerol,直接使用,無需加熱。上樣量根據凝膠厚度和大小而定,請參考說明書中的使用方法。  
產品特點:  
1. 八條帶組成的蛋白Marker分子量范圍廣泛;  
2. 與蛋白印跡膜具有親和性,可以監(jiān)測Western blot實驗中的轉膜效率;  
3. 50 kDa綠色條帶、70 kDa和300 kDa橙色條帶組合便于實時觀察電泳進程、判斷蛋白分子量。  
中文名稱:預染蛋白Marker(BIO-RAD)  
英文名字:Precision Plus Protein Dual Color Standards alue Pack  
分子式:分子量: 預染蛋白MARKER(BIO-RAD)的溶解性,預染蛋白MARKER(BIO-RAD)在水中的溶解性,預染蛋白MARKER(BIO-RAD)在生理鹽水中的溶解性,預染蛋白MARKER(BIO-RAD)在PBS緩沖液中的溶解性,預染蛋白MARKER(BIO-RAD)在DMSO、乙醇等有機溶劑中的溶解性,預染蛋白MARKER(BIO-RAD)在細胞實驗方面的應用,預染蛋白MARKER(BIO-RAD)在大鼠等動物實驗方面的應用。  
中文名稱:預染超低分子量蛋白Marker(3.3kD-31.0kDDa)  
英文名字:Ultra LowMolecular Weight Protein Marker  
產品簡介:  
預染超低分子量蛋白質Marker為蛋白質和多肽混合物的凍干粉,每種預染蛋白含量約為40mg,配有一支1×上樣緩沖液。  
使用說明:  
1.開封后,溶于200ml 1×上樣緩沖液,可根據需要進行小量分裝,每管10ml,-20℃貯存,每次取一管使用,避免反復凍融。  
2.使用前取分裝后的小管室溫融化后即可上樣電泳。  
儲存條件:  
-20℃保存,有效期為一年。避免反復凍融,建議分裝凍存。  
中文名稱:預染彩虹蛋白marker (11-245KD)  
英文名字:Prestained Protein Ladder  
產品簡介:  
本產品包含12種彩色預染的已知分子量標準蛋白,分子量范圍為11kD-245kD,每種蛋白含量約為0.2-0.4mg/ml。預染marker可以用于直接觀察蛋白質電泳狀況以及清晰地判斷Western Blot的轉膜效果。SDS-PAGE凝膠電泳或轉移到PDF或NC膜上可得到清晰的10條彩色蛋白條帶,其中25kD為綠色條帶,75kD為紅色條帶,其余10條是藍色條帶。  
產品特點:  
三色預染,顏色鮮亮,條帶整齊,便于觀察。  
穩(wěn)定性能突出,檢測4℃放置兩年無明顯降解。  
用量少,節(jié)約成本,僅5ul即可*呈現(1.5mm,10孔梳)。  
廣譜多帶,一支即可滿足多種實驗需求。  
注意事項:  
1.本產品含有較高濃度甘油,常規(guī)-20℃保存為液體狀態(tài),可直接使用。若冰箱溫度不穩(wěn),導致結冰,可適當分裝后置于4℃保存,至少穩(wěn)定6個月。  
2.Marker分離效果與PAGE膠濃度相關,若分離膠濃度低于15%,25kD以下條帶不易分離,但不影響綠色(25KD)及以上條帶。如果目的條帶小于25KD,建議分離膠濃度大于或等于15%。  
3.轉膜效果與轉膜時間有關,需根據客戶目的條帶大小而定,如果轉膜后較大分子量條帶有部分未轉膜成功,屬于正?,F象。  
儲存條件:  
-20℃保存,有效期至少2年。  
 



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