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上海邦景實業(yè)有限公司
主營產品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
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更新時間：2022-06-13 14:32:58瀏覽次數：109
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中文名稱：Rosetta(DE3)化學感受態(tài)細胞
英文名稱：Rosetta(DE3)Chemically Competent Cell
產品規(guī)格：10×100μl|50×100μl
發(fā)貨周期：1～3天
產品貨號：BJ-F0164688
生物醫(yī)學實驗中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點，本公司開發(fā)了本產品。產品介紹：
Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞具有氯抗性，補充大腸桿菌缺乏的6種稀有密碼子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)對應的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統(tǒng)中的表達水平，該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)(DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)，同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。 Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率高達108cfu/μg。 保存條件：-80℃ 基因型： F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)pRARE(argU，argW，ileX，glyT，leuW，proL)(CamR) 操作說明： 1.取100μl冰上融化的Rosetta(DE3)感受態(tài)細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。 4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。 |
使用方法：本產品僅用于科研
注意：標本采集人員需按有關規(guī)定做好個人防護。咽、鼻拭子最好在發(fā)病的3天采集。
在安全柜內將本產品分裝到自備的、螺旋蓋內有橡膠圈的5mL旋蓋塑料管里(一級容器)。
鼻拭子的采集：將棉簽輕輕插入鼻道內鼻腭處，停留片刻后緩慢轉動退出。以同一拭子拭兩側鼻孔。將棉簽浸入上步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
咽拭子的采集：用棉簽擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁，將棉簽浸入第一步得到的、裝有3mL本產品的旋蓋離心管中，棄去拭子尾部，擰緊螺旋蓋。
直接在一級容器上用油性記號筆寫明樣本的種類、采樣時間、編號、患者姓名。
將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內密封；每袋裝一份標本。同時也將標本有關信息填在標本送檢表上，連同一級容器封于塑料袋內。
將裝標本的密封袋放入自備的帶螺旋蓋內有橡膠圈的塑料容器(二級容器)內，擰緊蓋，在容器上標明有關信息。同一患者2份以上的密封標本，可以放在同一個二級容器內。二級容器要承受不少于95 KPa的壓力，內襯具吸水和緩沖能力的物質。所有容器必須印有生物危險標注。
將二級容器擺放在專用運輸箱內(或疫苗運輸箱)，放入冰排，然后以柔軟物質填充，并密封，由專人(2人)運送，不得郵寄，最好使用專車。
采集的標本若不能在24小時內送達，則應盡快在-70℃以下保存。無-70℃條件的，需在4℃冰箱短時間暫存，并盡快聯系遞送標本。流感病毒在-20℃～-40℃時不穩(wěn)定，故長期保存最好在-70℃溫度以下進行。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。
創(chuàng)傷弧菌（Vibrio vulnificus）鑒定
（Staphylococcus aureus）鑒定
空腸彎曲菌（Campylobacter jejuni）鑒定
大腸彎曲桿菌（Campylobacter coli）鑒定
蠟質芽孢桿菌（Bacillus cereus）鑒定
小鼠/離子轉運ATP酶β3肽(ATP1β3)elisa ，英文名： ATP1β3 ELISA Kit
人泛素分解酶(DUB)ELISA檢測試劑盒Humandeubiquitinatingenzyme,DUBELISAKit 96T/48T
大鼠胰島細胞抗體(ICA)免疫試劑盒 Rat islet cell aibody,ICA ELISA Kit
英文名稱HumanApelin-12ELISAKIT人Apelin-12規(guī)格：96T/48T
酚藏花紅(PHENOSAFRANINE)植物細胞繁殖測定試劑盒100次
ELISAKitCDK-4人周期素依賴性4規(guī)格：48T/96T
Rosetta(DE3)化學感受態(tài)細胞豚鼠γ干擾素(IFN-γ)elisa分析檢測試劑盒
豚鼠α干擾素(IFN-α)elisa檢測試劑盒
豚鼠α干擾素(IFN-α)elisa分析檢測試劑盒
豚鼠α2-HS糖蛋白(αHSG)elisa檢測試劑盒
豚鼠α1-微球蛋白(α1M)elisa檢測試劑盒
