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技術(shù)文章

土壤硝酸還原酶(Solid-Nitrate,S-NR)試劑盒說(shuō)明書(shū)

閱讀:719發(fā)布時(shí)間:2018-11-19

土壤硝酸還原酶(Solid-Nitrate Reductase,S-NR)試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                    分光光度法 50管/24樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義

S-NR 催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究 S-NR  的活性

對(duì)合理施肥,降低氮素的損失具有重要意義。

測(cè)定原理

S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ  +NADH+H  →  NO2ˉ +NAD+  +H 2 O;產(chǎn)生的亞

硝酸鹽能夠在酸性條件下,與對(duì)氨基苯磺酸及  α -  萘胺定量生成紅色偶氮化合物;生成的

紅色偶氮化合物在  540 nm  有大吸收峰,可用分光光度法測(cè)定。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一:液體 10mL×1瓶,-20℃保存。

試劑二:液體 4mL×1瓶,-20℃保存。

試劑三:液體 12.5mL×1瓶,4℃保存(如出現(xiàn)結(jié)晶析出,60-90℃水浴溶解后使用)。

試劑四:液體 12.5mL×1瓶,4℃保存。

試劑五:標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液 1mL,-20℃保存。

0.1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液的配制:用時(shí)將試劑五稀釋100倍,即取0.1ml 加蒸餾水定容至10ml。

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37度烘箱風(fēng)干,過(guò)30~50目篩。

測(cè)定操作表

混勻,室溫顯色 20min后,4000g25℃離心10min,用蒸餾水調(diào)零,540nm下讀取各管吸

光值。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)一次。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

S-NR活性計(jì)算:

單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)S-NR活力單位。

S-NRμmol /d/g=C標(biāo)準(zhǔn)×A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總÷W÷T=12×

A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.1μmol/mL;V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.5mL;T:反應(yīng)時(shí)間,

1h=1/24d; W:樣本質(zhì)量,0.1g。


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