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Soluble Rat ICAM-1 ELISA Kit

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TNF-α試劑盒

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上海聯(lián)邁生物工程有限公司

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產(chǎn)品簡介

Soluble Rat ICAM-1 ELISA Kit
規(guī)格: 96T
檢測范圍： 31.2pg/ml→2000pg/ml
敏感性：＜1pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。
保存： 2-8℃（頻繁使用時(shí)）；-20℃（長時(shí)間不用時(shí)）。
有效期： 6 個(gè)月（4℃）；12 個(gè)月（-20℃）。
用途：用于體外定量分析大鼠血清、血漿、細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清。

詳細(xì)介紹

Soluble Rat ICAM-1 ELISA Kit
規(guī)格: 96T
檢測范圍： 31.2pg/ml→2000pg/ml
敏感性：＜1pg/ml
特異性：系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。
保存： 2-8℃（頻繁使用時(shí)）；-20℃（長時(shí)間不用時(shí)）。
有效期： 6 個(gè)月(4℃)；12 個(gè)月（-20℃）。
用途：用于體外定量分析大鼠血清、血漿、細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清。
Soluble Rat ICAM-1 ELISA Kit工作原理
Intercellular adhesion molecular 1, ICAM-1,CD54。細(xì)胞間粘附分子 1。是一種糖蛋白質(zhì)，分子量85-110KDa。結(jié)合 LFA-1 和 Mac-1，參與細(xì)胞的粘附。ICAM-1 在白細(xì)胞，上皮細(xì)胞和非生長狀態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞僅有微弱表達(dá)，但受 IFN，TNF-a, IL-1β和 LPS 的刺激而增加。
可溶性 ICAM-1 以生物活性形式出現(xiàn)在血清中，可能是從細(xì)胞表面酶切下來的產(chǎn)物。各種炎癥如感染性休克，LAD，癌癥和移植，血中濃度都會(huì)升高。本試劑盒所用的標(biāo)準(zhǔn)品是基因重組表達(dá)產(chǎn)物，是一個(gè)二硫鍵連接的二聚體蛋白質(zhì)，單鏈共 493 個(gè)氨基酸，分子量約 78KDa，由于糖化結(jié)果，SDS-PAGE 顯示分子量為 110-125KDa，是 ICAM-1 位于細(xì)胞膜外的部分。
所提供的大鼠 ICAM-1 ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（EnzymeLinked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。預(yù)先包被的抗體為單克隆抗體，克隆號 141017。檢測相抗體為近 100%純度的親和純化多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS 或 TBS 洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過 PBS或 TBS 的*洗滌后用底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠 ICAM-1 呈正相關(guān)。

內(nèi)容	規(guī)格	數(shù)量
預(yù)包被抗 ICAM-1 抗體的 96 孔板	96T	1
凍干標(biāo)準(zhǔn)品	10ng/管	2
生物素標(biāo)記	130ul	1
親和素-過氧化物酶復(fù)合物	130ul	1
樣品稀釋液	30ml	1
抗體稀釋液	12ml	1
ABC 稀釋液	12ml	1
TMB 顯色液	10ml	1
TMB 終止液	10ml	1
洗滌緩沖液(25X)	20ml	1
封板膜		2
說明書		1

需要而未提供的試劑和器材

1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

2. 自動(dòng)洗板機(jī)。

3. 恒溫箱

4. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時(shí)，用多通道移液器。

5. 干凈的試管和 Eppendof 管。

6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍，成 1X 洗滌緩沖液。

注意事項(xiàng)

1．使用前 TMB 顯色液應(yīng)為無色透明溶液，若發(fā)現(xiàn)顏色異常，請及時(shí)與廠家。

2．用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。

3 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活。

4．為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

5．禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。

6. 本公司提供的 96 孔酶標(biāo)板是單條可拆型酶標(biāo)板，用戶可按需求使用；剩余的酶標(biāo)板請

按保存條件貯存。

7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時(shí)應(yīng)避免用力過大導(dǎo)致液體濺出。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內(nèi)，浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

樣品的準(zhǔn)備和保存

樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。

細(xì)胞培養(yǎng)上清——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固 30 分鐘，離心 1500×g 15 分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分鐘內(nèi)離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進(jìn)一步離心 10000×g 10 分鐘，以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細(xì)胞裂解液——對于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常 10 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。對于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打把細(xì)胞吹散，用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后，10000—14000g 離心 3-5 分鐘，取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

樣品稀釋的一般原則

用戶須估計(jì)樣品待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據(jù)待測因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的

稀釋方案：

高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。

中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。

低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。

特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按 1：2 稀釋。

操作程序總結(jié)：

1．加樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng) 90 分鐘。不洗。

2．加生物素標(biāo)記抗體，37℃反應(yīng) 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。

3．加 ABC，37℃反應(yīng) 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。

4． TMB37℃反應(yīng) 15-20 分鐘。