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環(huán)狀DNA全基因組擴(kuò)增試劑盒

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環(huán)狀DNA全基因組擴(kuò)增試劑盒環(huán)狀DNA包括質(zhì)粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA和某些病毒DNA，但這些DNA樣品中往往含有宿主或細(xì)胞核的基因組DNA，如果直接進(jìn)行WGA擴(kuò)增，則會(huì)得到基因組DNA和上述環(huán)狀DNA的混合物。為了特異性地?cái)U(kuò)增環(huán)狀DNA，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，它有如下優(yōu)點(diǎn)：
1．即開即用，不需要單獨(dú)準(zhǔn)備所需試劑和對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化。

詳細(xì)介紹

環(huán)狀DNA全基因組擴(kuò)增試劑盒

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環(huán)狀DNA全基因組擴(kuò)增試劑盒	30次	詢價(jià)

環(huán)狀DNA包括質(zhì)粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA和某些病毒DNA，但這些DNA樣品中往往含有宿主或細(xì)胞核的基因組DNA，如果直接進(jìn)行WGA擴(kuò)增，則會(huì)得到基因組DNA和上述環(huán)狀DNA的混合物。為了特異性地?cái)U(kuò)增環(huán)狀DNA，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，它有如下優(yōu)點(diǎn)：

1．即開即用，不需要單獨(dú)準(zhǔn)備所需試劑和對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化。

2．整合了本公司的線狀DNA清除劑，減少了其對(duì)環(huán)狀DNA擴(kuò)增的污染。

3．可以用于質(zhì)粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA、環(huán)狀病毒DNA和任何環(huán)狀DNA的WGA。

4．得到的產(chǎn)物可用于多種后續(xù)試驗(yàn)，包括多重PCR、長(zhǎng)片斷PCR、定量PCR、克隆、文庫(kù)構(gòu)建、測(cè)序、基因芯片分析、各種遺傳分析等。

5．如果是質(zhì)粒，得到得WGA產(chǎn)物可以直接轉(zhuǎn)化酵母，也可以酶切后自連，再轉(zhuǎn)化細(xì)菌，能提高轉(zhuǎn)化效率上千倍。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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