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南京億迅生物科技有限公司
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| 參考價(jià) | ￥ 1710 | ￥ 1280 |
| 訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
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- 所在地 南京市
更新時(shí)間：2019-11-07 11:06:52瀏覽次數(shù)：502
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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測試劑盒
測定原理
復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q可進(jìn)一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計(jì)算該酶活性。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制
試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：5mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：0.5 mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑七：液體2.5mL×1瓶，4℃保存；
工作液的配制：臨用前依次把試劑五和試劑六轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解。
復(fù)合體Ⅱ的提?。?/span>
- 準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
- 4 ℃ 600 g離心5min。
- 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心10min。
- 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅱ（此步可選做）。
- 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于復(fù)合體Ⅱ酶活性測定。
測定步驟：
- 調(diào)零
用蒸餾水于605nm處調(diào)零。
- 樣本測定
（1）取40μL酶液和800μL工作液加入1mL玻璃比色皿，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。
（2）取出比色皿，加入100μL試劑七，混勻；立即記錄605nm處初始吸光值A1，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中準(zhǔn)確反應(yīng)2min，記錄605nm處2min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅱ活性檢測試劑盒
