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百螢問號:細(xì)胞轉(zhuǎn)染前如何選擇轉(zhuǎn)染方法?

時間:2023/9/22閱讀:34
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今天百螢為大家介紹細(xì)胞轉(zhuǎn)染的常見方法,以及它們之間的優(yōu)缺點比較。細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法包括DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、陽離子脂質(zhì)體法、陽離子聚合物、病毒介導(dǎo)法、Biolistic 顆粒傳遞法 (基因槍粒子轟擊法)、顯微注射法、電穿孔法等。感興趣的小伙伴一起來看看吧!

轉(zhuǎn)染方法

原理

主要應(yīng)用

特點

DEAE-葡聚糖法

帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞

瞬時轉(zhuǎn)染

相對簡便、重復(fù)比磷酸鈣好,但對細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS細(xì)胞系

磷酸鈣法

磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,染瞬轉(zhuǎn)染

不適用于原代細(xì)胞(所需的DNA濃度較高),操作簡便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用
細(xì)胞建議用CSCL梯度離心,轉(zhuǎn)染是拷貝數(shù)較多

陽離子脂質(zhì)體法

帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物,然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細(xì)胞膜上的唾液酸殘基的負(fù)電核結(jié)合;另一種解釋是通過細(xì)胞是內(nèi)吞作用而被進(jìn)入細(xì)胞。(若DNA濃度過高,中和脂質(zhì)體表面電核,而降低了與細(xì)胞的結(jié)合能力)

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

使用方法簡單,可攜帶大片段DNA,通用于各種類型的裸露DNA或RNA,能轉(zhuǎn)染各種類型的細(xì)胞,沒有免疫原性。雖在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率,但在體內(nèi),能被血清,并在肺組織內(nèi)累積,誘發(fā)強(qiáng)烈的抗炎反應(yīng),導(dǎo)致高水平的毒性,這在很大程度上限制了其應(yīng)用

陽離子聚合物

帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

除了具有陽離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高,操作簡單,適用范圍廣,重復(fù)性好等特點外,還具有在體內(nèi),轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低等特點,是新一代的轉(zhuǎn)染試劑。

病毒介導(dǎo)法

逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA)

通過病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用而進(jìn)入宿主細(xì)胞,之后反轉(zhuǎn)入酶啟動合成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞

可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等,但攜帶基因不能太大(<8kb),細(xì)胞需處分裂期,需考慮因素

腺病毒(雙鏈DNA)

先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合,繼而在αv整合素介導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞

瞬時轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞

可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,需考慮因素

Biolistic 顆粒傳遞法 (基因槍粒子轟擊法)

將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞,DNA在胞內(nèi)逐步釋放,表達(dá)

瞬時性轉(zhuǎn)染,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

可用于:人的表皮細(xì)胞,纖維原細(xì)胞,淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞

顯微注射法

用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細(xì)胞

電穿孔法

高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

適用性廣,除了質(zhì)粒外,還可轉(zhuǎn)染大的基因組(>65kb)但細(xì)胞致死率高,DNA和細(xì)胞用量大, 需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件,拷貝數(shù)較少1-20







目前市場上大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑均采用陽離子脂質(zhì)體法,百螢出售的Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑也采用該方法,它毒性更低,并且使轉(zhuǎn)染細(xì)胞具有更高的生存能力。與相同方法下的的大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑相比,Transfectamine 5000更易于使用,并且不需要特殊的培養(yǎng)基。

 貨號

 品名

 規(guī)格

價格

60020-1

Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑

100ul

600

60020-3

Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑

3x100ul

1500

60020

Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑

500ul

2460

60021

Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑

1ml

3720

60022

Transfectamine 5000轉(zhuǎn)染試劑

5ml

9456




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