公司簡介

西安百螢生物科技有限公司是一家專注從事生物、化學試劑及其試劑盒的；主要以熒光探針，分子探針，核酸/蛋白質標記、細胞檢測等技術和產品為研發(fā)核心，產品應用于基因合成、細胞檢測、活體示蹤，抗體標記、新藥篩選等領域。

我們的Cell Meter Annexin V凋亡檢測試劑盒 是一套用于檢測細胞生存力的工具。 有多種參數可用于檢測細胞活力。 該特定試劑盒旨在通過測量磷脂酰*（PS）的轉運來檢測細胞凋亡。 百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Cell Meter Annexin V凋亡檢測試劑盒。

實驗方案

樣品實驗方案

簡要概述

用測試化合物制備細胞（200 µL /樣品）

添加膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500分析溶液

在室溫下孵育30-60分鐘

使用帶有525/40 nm濾光片（AmCyan通道）的流式細胞儀或帶有紫色濾光片組的熒光顯微鏡分析細胞

實驗步驟

1.用膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500制備和孵育細胞：

1.1用測試化合物處理細胞一段時間（對于用星形孢菌素處理過的Jurkat細胞，需要4-6小時）以細胞凋亡。

1.2離心細胞以獲得1-5×105細胞/管。

1.3將細胞重懸于200 µL分析緩沖液（組分B）中。

1.4在細胞中加入2 µL Annexin V-mFluor Violet 500（組分A）。

1.5可選：向壞死的細胞中加入2 µL 100X碘化丙啶（組分C）。

1.6避光保存，于室溫下孵育30至60分鐘。

1.7在使用流式細胞儀或熒光顯微鏡分析細胞之前，添加300 µL分析緩沖液（組分B）以增加體積。

1.8使用帶有525/40 nm濾光片的流式細胞儀（AmCyan通道）或帶有紫色濾光片組的熒光顯微鏡檢測熒光強度。

2.通過使用流式細胞儀進行分析：

2.1使用帶有525/40 nm濾光片的流式細胞儀（AmCyan通道）定量膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500結合。 將碘化丙啶加入細胞后，使用610/20 nm濾光片（PE-德克薩斯紅通道）測量細胞活力。 注意：對貼壁細胞的膜聯(lián)蛋白V結合流式細胞術分析未經過常規(guī)測試，因為在細胞分離或收獲過程中可能會發(fā)生特定的膜損傷。 

3.通過使用熒光顯微鏡進行分析：

3.1孵育后用移液管吸移細胞懸液，用測定緩沖液沖洗1-2次，然后用測定緩沖液重懸細胞。

3.2將細胞添加到載玻片蓋玻片的載玻片上。注意：對于貼壁細胞，建議直接在蓋玻片上生長細胞。與膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500一起孵育后，用測定緩沖液沖洗1-2次，然后將測定緩沖液加到蓋玻片上。將玻片上的蓋玻片倒置并可視化細胞。與膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500孵育后，還可以將細胞固定在2％甲醛中，并在顯微鏡下觀察。

3.3使用紫羅蘭濾光片組在熒光顯微鏡下用膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500分析凋亡細胞。當碘化丙錠添加到細胞中時，使用TRITC通道測量細胞活力。質膜上的綠色染色表明膜聯(lián)蛋白V-mFluor Violet 500與細胞表面的PS結合。