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我們的Cell Meter 磷脂酰*細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 是一套用于檢測(cè)細(xì)胞生存力的工具。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力。該特定試劑盒旨在通過測(cè)量磷脂酰*（PS）的轉(zhuǎn)運(yùn)來檢測(cè)細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞凋亡中，PS轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外部小葉。磷脂酰*在細(xì)胞表面的出現(xiàn)是細(xì)胞凋亡初始/中間階段的普遍指標(biāo)，可以在觀察形態(tài)變化之前進(jìn)行檢測(cè)。該試劑盒中使用的我們專有的Apopxin PS指示劑是基于小分子的PS指示劑。 PS指示劑與膜PS結(jié)合后具有藍(lán)色熒光。試劑盒中使用的PS染料具有與PacificBlue®（PacificBlue®是Invitrogen的商標(biāo)）相似的光譜特性。藍(lán)色熒光染料在405nm處被紫色激發(fā)光充分激發(fā)，并在?450 nm處發(fā)出強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。該試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可與配備了紫色激發(fā)光的流式細(xì)胞儀一起使用。它特別適用于細(xì)胞的多色流式細(xì)胞術(shù)分析。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供的Cell Meter 磷脂酰*細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

用測(cè)試化合物制備細(xì)胞（200 µL /樣品）
添加Apopxin 紫色450分析溶液
在室溫下孵育30至60分鐘
使用帶有450/40 nm濾光片（Pacific Blue通道）的流式細(xì)胞儀或帶有紫色濾光片的熒光顯微鏡分析細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)步驟

1.用Apopxin 紫色450準(zhǔn)備和孵育細(xì)胞：

1.1用測(cè)試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間（對(duì)于用星形孢菌素處理過的Jurkat細(xì)胞，需要4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

1.2離心細(xì)胞以獲得1-5×105細(xì)胞/管。

1.3將細(xì)胞重懸于200 µL分析緩沖液（組分B）中。

1.4向細(xì)胞中加入2 µL Apopxin 紫色450（組分A）。

1.5可選：向壞死細(xì)胞中加入2 µL 100X碘化丙啶（組分C）。

1.6避光保存，于室溫下孵育30至60分鐘。

1.7在使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡分析細(xì)胞之前，添加300 µL分析緩沖液（組分B）以增加體積。

1.8使用帶有450/40 nm濾光片的流式細(xì)胞儀（Pacific Blue通道）或帶有紫色濾光片的熒光顯微鏡檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

2.通過使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析：

2.1使用帶有450/40 nm濾光片（Pacific Blue通道）的流式細(xì)胞儀定量Apopxin Violet 450結(jié)合物。將碘化丙錠加入細(xì)胞后，使用610/20 nm濾光片（PE-Texas Red通道）測(cè)量細(xì)胞活力。注意：由于對(duì)細(xì)胞的分離或收獲過程中可能會(huì)發(fā)生特定的膜損傷，因此不對(duì)貼壁細(xì)胞的Apopxin 結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行常規(guī)測(cè)試。

3.通過使用熒光顯微鏡進(jìn)行分析：

3.1孵育后用移液管吸移細(xì)胞懸液，用測(cè)定緩沖液沖洗1-2次，然后用測(cè)定緩沖液重懸細(xì)胞。

3.2將細(xì)胞添加到載玻片上。注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，建議直接在蓋玻片上生長(zhǎng)細(xì)胞。與Apopxin Violet 450孵育后，用Assay Buffer沖洗1-2次，然后將Assay Buffer加到蓋玻片上。將玻片上的蓋玻片倒置并可視化細(xì)胞。與Apopxin Violet 450孵育后，還可以將細(xì)胞固定在2％甲醛中，并在顯微鏡下觀察。

3.3在帶有紫色濾光片的熒光顯微鏡下，用Apopxin 紫色450分析凋亡細(xì)胞。當(dāng)?shù)饣ぬ砑拥郊?xì)胞中時(shí)，使用TRITC濾波片檢測(cè)細(xì)胞活力。質(zhì)膜上的藍(lán)色染色表明Apopxin Violet 450與細(xì)胞表面的PS結(jié)合。