樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.用5×10 5到1×10 6細(xì)胞/ mL 的密度制備含測試化合物的細(xì)胞

2.準(zhǔn)備ThiolTrace Violet 500工作溶液并將其添加到細(xì)胞中

3.在37 o C 孵育20至30分鐘

4.在Ex / Em = 405/525 nm處讀取熒光強(qiáng)度-Pacific Orange

溶液配制

1.儲備溶液配制

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
ThiolTrace 紫羅蘭色500儲備液（500X）：
在小瓶ThiolTrace Violet 500中加入200 µL DMSO（未提供），并充分混合。 注意：分裝并在-20℃下存儲未使用的ThiolTrace Violet 500儲備液。 避免重復(fù)冷凍/融化循環(huán)。

2.工作溶液配制

ThiolTrace Violet 500工作溶液（1X）：
將1 µL ThiolTraceTM紫羅蘭色500儲備溶液加入您選擇的0.5 mL緩沖液中，并充分混合。 注意：可以在含有血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中制備ThiolTrace Violet 500工作溶液。

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操作步驟

1.用測試化合物處理細(xì)胞所需的時(shí)間。注意：對于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并在用ThiolTrace 紫羅蘭色工作溶液孵育之前，用含血清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所用的單個(gè)細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。

2.將細(xì)胞以1000 rpm的速度離心4分鐘，然后用1 mL所選緩沖液（可選）洗滌細(xì)胞。

3.將細(xì)胞重懸于0.5 mL ThiolTraceTM Violet 500工作溶液中，并在37oC培養(yǎng)箱中孵育20至30分鐘。注意：對于熒光顯微鏡，每孔添加200 µL ThiolTraceTM Violet 500工作溶液。

4.以1000 rpm離心細(xì)胞4分鐘，然后在1 mL所選緩沖液（可選）中洗滌細(xì)胞。

5.重懸于緩沖液中，使用太平洋橙濾光片組（Ex / Em = 405/525 nm），用流式細(xì)胞儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度。