5-FAM 5-羧基熒光素炔烴是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光素，5-FAM炔烴是通過(guò)與炔基反應(yīng)開(kāi)發(fā)熒光生物共軛物的良好試劑。 5-FAM是羧基熒光素的純化單一異構(gòu)體。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的5-羧基熒光素炔烴。

操作方案

標(biāo)記寡核苷酸

1.準(zhǔn)備以下試劑：

200mMTHPTA [tris（3-羥丙基三唑基甲基）胺]水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴修飾的低聚水溶液（盡可能濃縮，例如>10 mg / mL）

100mM抗壞血酸鈉水溶液

10mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關(guān)推薦的溶劑，請(qǐng)參閱我們的網(wǎng)站）

2.在反應(yīng)前將CuSO4與THPTA以1：2的比例混合并充分渦旋幾分鐘。該溶液在冷凍時(shí)可穩(wěn)定數(shù)周。

3.向炔烴改性的低聚物溶液中加入過(guò)量的染料疊氮化物（摩爾比為2-5當(dāng)量）。

4.加入5當(dāng)量的THPTA / CuSO4工作溶液（來(lái)自步驟1）。

5.加入10-30當(dāng)量的抗壞血酸鈉。

6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動(dòng)反應(yīng)混合物30-60分鐘。

7.通過(guò)所需的方法（例如HPLC）沉淀或純化乙醇。

標(biāo)記肽

1.準(zhǔn)備以下試劑：

200mM THPTA配體水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴修飾肽水溶液或DMF溶液（取決于您的肽溶解度，>10 mg / mL）

100 mM抗壞血酸鈉水溶液

10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關(guān)推薦的溶劑，請(qǐng)參閱我們的網(wǎng)站）

2.在反應(yīng)前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時(shí)可穩(wěn)定數(shù)周。

3.向炔烴修飾的肽溶液中加入過(guò)量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當(dāng)量）。

4.加入5-10當(dāng)量的THPTA / CuSO4。

5.加入10-20當(dāng)量的抗壞血酸鈉。

6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動(dòng)反應(yīng)混合物30-60分鐘。

7.通過(guò)HPLC純化您想要的肽。

標(biāo)記炔烴有機(jī)小分子

1.準(zhǔn)備以下試劑：

200 mM THPTA配體水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴化合物水溶液或DMF溶液（取決于您的化合物溶解度，> 10mg / mL，）

100mM抗壞血酸鈉水溶液

10mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關(guān)推薦的溶劑，請(qǐng)參閱我們的網(wǎng)站）。

2.在反應(yīng)前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。當(dāng)冷凍時(shí)，該溶液可穩(wěn)定數(shù)周。

3.向炔烴溶液中加入過(guò)量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當(dāng)量）。

4.加入25當(dāng)量的THPTA / CuSO4。

5.加入50當(dāng)量的抗壞血酸鈉。

6.在室溫下攪拌反應(yīng)混合物30-60分鐘。

7.通過(guò)色譜或其他方法純化您想要的分子。

標(biāo)記生物聚合物

1.準(zhǔn)備以下試劑：

200 mM THPTA配體水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烴改性的水中生物聚合物（盡可能濃縮，例如> 5毫克/毫升）

100 mM抗壞血酸鈉水溶液

10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關(guān)推薦的溶劑，請(qǐng)參閱我們的網(wǎng)站）。

2.在反應(yīng)前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時(shí)可穩(wěn)定數(shù)周。

3.向炔烴改性的生物聚合物溶液中加入過(guò)量的染料疊氮化物（負(fù)載比：5-20染料疊氮化物/炔烴）。

4.加入5摩爾當(dāng)量（參考染料疊氮化物）的THPTA / CuSO4。

5.加入10當(dāng)量的抗壞血酸鈉（參見(jiàn)染料疊氮化物）。

6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動(dòng)反應(yīng)混合物30-60分鐘。

7.通過(guò)凝膠過(guò)濾或透析純化您想要的分子。

標(biāo)記細(xì)胞，細(xì)胞裂解物或生物樣品

1.準(zhǔn)備以下試劑：

100mM THPTA配體水溶液

20mM CuSO4水溶液

300mM抗壞血酸鈉水溶液

2.5mM炔烴或疊氮化物標(biāo)記試劑水溶液或DMSO溶液

2.對(duì)于每個(gè)疊氮化物或炔烴修飾的細(xì)胞或細(xì)胞裂解物樣品，將以下試劑加入1.5 mL微量離心管中，然后短暫渦旋混合。

50μL細(xì)胞或細(xì)胞裂解液樣品

50μLPBS緩沖液

50μL5mM相應(yīng)的染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（或染料炔烴）檢測(cè)試劑

3.加入10μL100mM THPTA溶液，短暫渦旋混合。

4.加入10μL20mM CuSO4溶液，短暫渦旋振蕩。

5.加入10μL300mM抗壞血酸鈉溶液以引發(fā)點(diǎn)擊反應(yīng)，短暫渦旋混合。

6.保護(hù)點(diǎn)擊反應(yīng)不受光照，使其在室溫下孵育30分鐘。

7.點(diǎn)擊標(biāo)記細(xì)胞或細(xì)胞裂解物并準(zhǔn)備用于下游處理和分析。