NK-92細胞-人惡性非霍奇金淋巴瘤的自然殺傷細胞

 貨號：TCH-C292 

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞名稱：人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

細胞別稱：NK92; Natural Killer-92; NK-92.05; Neukoplast; aNK

細胞簡稱：NK-92

產(chǎn)品貨號：TCH-C292

種屬來源：人

組織來源：淋巴

疾病特征：惡性非霍奇金淋巴瘤

細胞形態(tài)：淋巴母細胞樣

生長特性：懸浮生長

培養(yǎng)體系：α－MEM+12.5% FBS+12.5%HS+0.2mM肌醇+0.1mM +0.02mM+200U/mLIL-2+1%P/S

配套培養(yǎng)基貨號：TCH-G292

 NK-92細胞是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細胞株。NK-92細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562細胞和Daudi細胞。NK-92細胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。NK-92細胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標記陰性。

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質(zhì)量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

NK-92細胞-人惡性非霍奇金淋巴瘤的自然殺傷細胞  培養(yǎng)要點

 1. NK92細胞為懸浮生長，大部分細胞聚集成團，少數(shù)細胞分散，并且細 胞間隙會有較多的死細胞和細胞碎片；

 2. NK92細胞對IL-2敏感。培養(yǎng)基中IL-2降解，將導(dǎo)致細胞狀態(tài)變差。IL-2 在-20℃解凍后置于4℃冰箱保存，4℃保存不應(yīng)超過一周。配制好的新鮮培養(yǎng)基 要盡快用完，建議每次使用前拿出來預(yù)熱，使用完畢后放回4℃冰箱保存；

 3. NK92細胞對離心敏感。正常培養(yǎng)時，換液周期為2~3天，建議交替使用 半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離 心次數(shù)，細胞狀態(tài)不佳或細胞量少的時候，一般不建議離心； 

4. NK92細胞對機械力較敏感。正常培養(yǎng)時，應(yīng)盡量避免吹打力道過大。 暴力吹打會使死細胞和細胞碎片增加。 

5. 正常培養(yǎng)時，NK 92細胞團的間隙有部分死細胞和細胞碎片是正常的， 如細胞碎片過多，可通過低速離心去除部分細胞碎片（800rpm,5min）。

 6. 血清質(zhì)量差異可能引起細胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。 

7. 細胞生長時，聚集的細胞團會逐漸增大，正常的細胞團在顯微鏡下呈現(xiàn) 白色透亮狀。若細胞聚集太多，出現(xiàn)細胞團中部發(fā)暗時，可傳代； 8. 細胞對培養(yǎng)液營養(yǎng)要求很高，在正常培養(yǎng)過程中應(yīng)避免細胞團塊太大， 這會導(dǎo)致營養(yǎng)不足；細胞團塊過大時，需要稍微吹散，注意控制吹打次數(shù)，不需 刻意吹散成單個細胞。

 9. NK92的傳代方法：將細胞團用移液器輕輕吹散，均分到兩個瓶子里， 每瓶再補充等量培養(yǎng)基。 

10. NK92的凍存方法：細胞凍存的時候，細胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。