新一代的300A硅膠填料分辨率、靈敏度和回收率
- *的選擇性可以幫助發(fā)現(xiàn)其它C18柱可能未分辨出的峰
- 低TFA濃度或甚至無TFA仍可得到對稱性良好的峰形
- 備有小口徑與毛細(xì)管口徑規(guī)格的色譜柱可用于液相質(zhì)譜分析
- 對蛋白質(zhì)的高回收率有利于放大制備
應(yīng)用:
1.*的選擇性
某牛胎蛋白(bovine fetuin)樣品,分子量約為36KDa的糖蛋白,經(jīng)解后用HPLC分析。在
對比柱1和2上,一些樣品組分會干擾肽的分離,表現(xiàn)為色譜“鼓包"上疊加峰。而Vydac MS柱*的
選擇性避免了這種分離問題。
2.分離度與峰對稱性
Vydac MS C4色譜柱為人生長因子(hGH)及其去酰胺降解物(desamido hGH)的分析提供了
好的分析效果。而對比柱顯示出其固定相對hGH過強(qiáng)的保留作用,分析效果不理想。
3.使用少甚至不使用TFA而仍然可得好的峰形
反相分析蛋白和肽的常規(guī)經(jīng)驗(yàn)是使用酸性流動相如在流動相中添加TFA。TFA能夠掩蓋被測物的堿基,
減少混合模式的保留,從而改善峰形。TFA還能改變對于不同被測物的保留與選擇性,調(diào)節(jié)TFA濃度能
夠優(yōu)化分離效果。但是TFA能吸收紫外,因此在低紫外波長下會增加背景值。而且TFA對于電噴霧質(zhì)譜
特別不利,它會干擾電噴霧過程中的離子生成,即所謂的“淬滅"效應(yīng),從而導(dǎo)致質(zhì)譜檢測的靈敏性
下降。
4.對疏水性蛋白質(zhì)的分析
跨膜蛋白(transmembrane proteins)是吸附在生物膜上的疏水性蛋白質(zhì),特別難以分離,Vydac
MS色譜柱為這類生物分子提供了的選擇性與峰形。在這個(gè)例子里,一個(gè)疏水性的跨膜蛋白得以與
一個(gè)合成的豆蔻酰衍生物和其它細(xì)胞組分分離。
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