呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）說明書
【產(chǎn)品】
用途
用于定性檢測有癥狀病人鼻沖洗液或*標(biāo)本中的呼吸道合胞病毒（RSV）融合蛋白抗原的免疫層析試驗。該試驗旨在用于新生兒或5歲以下兒童呼吸道合胞病毒感染的體外診斷。建議陰性結(jié)果做細(xì)胞培養(yǎng)進一步證實。
摘要和解釋
RSV是上呼吸道和下呼吸道感染的常見原因，也是嬰幼兒患細(xì)支氣管炎和肺炎的主要原因。RSV在每年的秋天、冬天和春天有規(guī)律的發(fā)生，出現(xiàn)感染和暴發(fā)。雖然RSV在較大兒童和成人可引起顯著的呼吸道疾病，但比嬰幼兒緩和的多。為了獲得有效的抗菌治療，RSV的快速鑒定診斷就顯得特別重要?？焖勹b定可以減少住院時間，減少抗菌素的使用，減少住院治療費1。
呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）提供了一種簡便快速檢測鼻洗液和*標(biāo)本中的 RSV的方法。由于它的簡便快速性，有助于做出治療和住院的決定。
測試原理
呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）是一種用鼻洗液和*標(biāo)本檢測RSV融合蛋白抗原的免疫層析膜試驗?？?/span>RSV抗體，樣本線，吸附到硝酸纖維素膜上，對照抗體作為第二條線吸附到同一膜上。抗RSV和對照抗體結(jié)合到可視粒子上，這種粒子干燥結(jié)合到惰性纖維支持物上。形成的結(jié)合物墊和有條紋的膜結(jié)合形成檢測條。檢測條置于一個硬紙盒的右邊，這個硬紙盒是一個書形的絞鏈的檢測裝置。拭子標(biāo)本（對照和病人的）需要一個預(yù)備步驟，鼻洗液標(biāo)本不需要預(yù)備。執(zhí)行試驗時，測試樣本加到檢測條的頂部的白墊上，閉合檢測裝置。標(biāo)本中的存在的RSV抗原與抗RSV抗體結(jié)合物結(jié)合，形成的抗原結(jié)合物復(fù)合物被固定的抗RSV抗體捕獲，形成樣本線。固定的對照線抗體捕獲一個可視的結(jié)合物，形成一條粉紅色的對照線。對照線在未檢測的裝置中是藍(lán)色的。試驗結(jié)果用可視的檢測的粉紅色到紫色線的存在與否來解釋。陽性結(jié)果，在15分鐘讀數(shù)時，會出現(xiàn)一條樣本線和一條對照線。陰性結(jié)果，在15分鐘讀數(shù)時，只出現(xiàn)一條對照線，表明樣本中未檢測到RSV抗原。對照線未出現(xiàn)，或仍為藍(lán)色，表示無論樣本線出現(xiàn)與否，測試無效。
試劑和材料
提供的材料
檢測卡：包被有鼠抗RSV抗原特異抗體和對照線抗體的膜與鼠抗RSV抗體結(jié)合物和對照線抗體結(jié)合物結(jié)合在一個折合式檢測卡上。未檢測的膜在對照線區(qū)域有一條藍(lán)色線。
移液管：固定體積（100μl）的移液管用于將樣本轉(zhuǎn)移到檢測裝置中。只能用廠家提供或能轉(zhuǎn)移100μl樣本體積的校正管。
陽性對照拭子：滅活的RSV干燥結(jié)合到拭子上。
陰性對照拭子；滅活的A群鏈球菌干燥結(jié)合到拭子上。
對照拭子用的瓶裝洗脫液：盛有一定體積（0.5ml）洗脫液，用于洗脫對照拭子。不要使用其他洗脫液。
未提供的材料
時鐘、秒表或跑表；鼻洗液收集容器，*，運輸媒介。
可選物品
鼻咽（NP）拭子標(biāo)本附件包：
*：用于呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）的無菌泡沫拭子。
用于拭子標(biāo)本的洗脫液小瓶：
瓶中盛有一定體積的洗脫液（0.5 ml），用于處理要測試的拭子標(biāo)本。
注意事項
1． 體外診斷用。
2． 使用前要將檢測裝置密封在錫箔中。
3． 不要使用過期的試劑盒。
4． 不要將不同批號試劑盒的試劑混合使用。
5． 檢測條頂部的白色樣本墊盛有從病毒中提取靶抗原的試劑，為了保證*操作，加樣時將標(biāo)本慢慢加到墊的*，以使所有樣本都吸附到墊上。
6． RSV陽性對照拭子是用滅活的RSV感染組織培養(yǎng)細(xì)胞準(zhǔn)備的，隨后用生物測定程序進行了測試。測定時要遵守一切注意事項。樣本可能有感染性，應(yīng)當(dāng)根據(jù)地方、州和聯(lián)邦的法規(guī)建立處理和處置措施。
7． 檢測中加入的試劑不足時會出現(xiàn)無效結(jié)果。為確保加入足夠量的體積，在將吸管中的內(nèi)容物加到樣本墊上時，要確定移液管的下部是充盈的、沒有氣泡產(chǎn)生。如果有空氣存在，通過擠壓上部的吸球，將標(biāo)本排回到容器中，重新吸入標(biāo)本。必要時，換一個新吸管。
8． 測試鼻洗液標(biāo)本時，吸樣本時要避開粘液部分。如果吸管堵塞，致使下部柄部不充盈，通過擠壓上部的吸球把標(biāo)本排回到容器中，重吸樣本，必要時換一個新吸管。
9． 聚酯、人造纖維、泡沫和棉花*都有易彎曲的柄，評估發(fā)現(xiàn)這些都可用于呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）。不要用藻酸鈣*。
10． 所有移液管和洗脫瓶都是單次使用的，不要用于多個樣本。
貯存和穩(wěn)定性
試劑盒在室溫（59-86℉，15-30℃）保存，呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）在失效期前是穩(wěn)定的。失效期標(biāo)注在外包裝和盒內(nèi)。
標(biāo)本采集和處理
為了取得*結(jié)果，請使用新鮮*或鼻洗液標(biāo)本。
*：
聚酯、人造纖維、泡沫和棉花*都有易彎曲的柄，評估發(fā)現(xiàn)這些都可用于本試劑盒。將收集后的拭子標(biāo)本在1小時內(nèi)加入到0.5~3.0ml的適宜的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中。如果不能立即測定，洗脫液拭子標(biāo)本可在室溫保存4小時，或2-8℃保存48小時。測試前將標(biāo)本平衡至室溫，并輕輕旋動。
鼻洗液：
用與病人年齡相稱的操作，在標(biāo)準(zhǔn)采樣杯中收集洗液標(biāo)本。如果不能立即測定，洗液可在室溫保存4小時，或2-8℃保存48小時。測試前將標(biāo)本平衡至室溫，并輕輕旋動。洗液標(biāo)本可在測試前加入到3.0ml的適宜的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中。轉(zhuǎn)移介質(zhì)可導(dǎo)致洗液稀釋，這種稀釋可能像操作部分報道的那樣降低試驗敏感性。
轉(zhuǎn)移介質(zhì)：
下列轉(zhuǎn)移介質(zhì)受過測試，適用于本試劑盒。
Amies介質(zhì)
Binax洗脫液
Hank,s鹽平衡液
M4介質(zhì)
M4RT介質(zhì)
M5介質(zhì)
鹽水
Stuart,s介質(zhì)
質(zhì)量控制
日常質(zhì)量控制：
呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）內(nèi)嵌有操作對照。作為日常質(zhì)量控制，健侖生物技術(shù)人員建議每次試驗都要記錄這些對照結(jié)果。
操作對照
A．未檢測裝置在對照位置有一根藍(lán)色線。如果進行試驗試劑起作用了，檢測裝置中的這根藍(lán)色線將變?yōu)榉奂t色。
B． 結(jié)果窗口中清晰的背景顏色是陰性背景對照，15分鐘內(nèi)窗口背景顏色會從粉紅色到白色。背景顏色不應(yīng)干擾測試。
外部陰陽性對照：
建議用陰陽性對照確保：
l 所用試劑有效
l 試驗操作正確
呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）內(nèi)裝有陰陽性對照拭子。這些拭子將監(jiān)控試劑故障。陽性對照確保測定準(zhǔn)確。每打開一個新試劑盒都要測試這些拭子，其他對照遵照下列要求做：
l 地方、州和/或聯(lián)邦法規(guī)
l 遵照集團和/或本試驗室的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制程序
為了正確指導(dǎo)質(zhì)量控制操作，請參閱NCCLS EP12A和42CFR493.1202（C）（*美國用戶）。
如果未得到正確的質(zhì)控結(jié)果，請不要報告病人結(jié)果，在工作時間健侖生物技術(shù)部（EST）。
樣本準(zhǔn)備步驟
鼻洗液：
鼻洗液樣本不需要預(yù)備，直接進入測定程序。
*：
在0.5-3.0ml的液體轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中轉(zhuǎn)動洗脫拭子，進入測試程序。注意：如果在洗脫液中洗脫拭子，按照下列程序預(yù)備對照拭子。
對照拭子：
1． 試劑盒內(nèi)盛有裝滿洗脫液的小瓶，將瓶蓋開啟。
2． 將欲測試拭子放入瓶中，將拭子在液體中轉(zhuǎn)動3圈。
3． 將拭子按在瓶壁上轉(zhuǎn)動，使樣本從拭子中移出。
4． 扔掉拭子。
5． 盡早檢測液體樣本，進入檢測程序。
測試程序
1． 測試前將裝置從錫箔中取出平放在工作臺上。
2． 將移液頭插入液體樣本中，擠壓上部吸球吸液。當(dāng)吸液頭部注滿液體后松開吸球，這將會把液體吸入移液管中。移液管下部不要產(chǎn)生空氣。
3． 看檢測裝置上的箭頭找到白色樣本墊，通過擠壓上部吸球，慢慢將移液管中液體全部（100μl）加入到樣本墊的中部。
4． 立即從檢測裝置中揭去粘附襯，合上并密封裝置，15分鐘時讀窗口中的結(jié)果。早于或晚于15分鐘結(jié)果可能不準(zhǔn)確。
注意：讀結(jié)果時，如有必要，將裝置傾斜以減少眩光。
結(jié)果解釋
對陰性標(biāo)本，窗口底部的藍(lán)色對照線變紫紅色，無其他線出現(xiàn)。
對陽性標(biāo)本，藍(lán)色對照線變紫紅色，上部的樣本線也變紫紅色。
如果對照線仍為藍(lán)色或根本沒有出現(xiàn)，試驗結(jié)果無效。
對無效試驗，用一新的檢測裝置重做。如果問題沒有解決，請廠家或者中國地區(qū)總代理商廣州健侖生物科技有限公司。
結(jié)果報告
建議報告結(jié)果
陽性
RSV抗原陽性。活病毒存在時可能出現(xiàn)陽性結(jié)果。
陰性
RSV抗原陰性。由于RSV不能被排除的感染，樣本中的抗原可能在檢出限以下。健侖生物技術(shù)人員建議對陰性樣本做培養(yǎng)。
局限性
呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）檢測活的和死的RSV。測試結(jié)果與標(biāo)本中的抗原量有關(guān)，可能與用同一標(biāo)本做細(xì)胞培養(yǎng)所得結(jié)果不*。
標(biāo)本采集量不足或病毒排出水平低可能出現(xiàn)差一點的結(jié)果，甚至可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
陰性結(jié)果不能排除RSV感染，也不能排除造成呼吸道感染的其他病毒的感染。因此，所得結(jié)果要結(jié)合臨床結(jié)果作出準(zhǔn)確診斷。測試結(jié)果在用palivizumab治療的病人中還沒進行評估。
然而一項分析研究表明palivizumab干擾呼吸道合胞病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）檢測RSV的能力。
抗菌素和干擾素的干擾潛力還未確定。
單克隆抗體可能不能檢測所有抗原變異株或新株RSV。
預(yù)期值
RSV的流行年年不同，在秋、冬季暴發(fā)。RSV的陽性檢出率受許多因素影響，包括標(biāo)本采集方法，所用試驗方法，地理位置，特定區(qū)域的流行。2002年臨床研究中，在洗液標(biāo)本中RSV的平均流行是2%，*標(biāo)本中是4%。2003年收集的*標(biāo)本中RSV的流行是21%。
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參考文獻
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2） Lopez, Juan A., R. Bustos, C. Orvell, M. Berois, J. Arbiza, B. Garcia-Barreno, J.Melero. Antigenic Structure of Human Respiratory Syncytial Virus Fusion Glycoprotein. Jr. of Virology, vol. 72, no.8, August 1998, pp.6922-6928.
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