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3T3-L(小鼠脂肪細(xì)胞)

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更新時(shí)間:2016-03-30 17:15:28瀏覽次數(shù):290次

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3T3-L(小鼠脂肪細(xì)胞) 具體操作
取出凍存管: 根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。
從液氮罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。
初學(xué)者易犯錯(cuò)誤:水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37
水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時(shí)間延長(zhǎng)。
離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。
一次復(fù)蘇細(xì)胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:將水浴鍋預(yù)熱至37
3T3-L(小鼠脂肪細(xì)胞)75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶 等。
迅速解凍:

迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動(dòng),使管中的液體迅速融化。
.-2min

凍存管內(nèi)液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min
制備細(xì)胞懸液:吸棄上清液。
向離心管內(nèi)加入0ml培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。
活化與細(xì)胞復(fù)蘇    收到細(xì)胞株包裹時(shí), 請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形, 若有請(qǐng)立即通知。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開始培養(yǎng), 或立即冷凍保存置于70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)
 細(xì)胞復(fù)蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-96液氮中的細(xì)胞快速融化至37,使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對(duì)細(xì)胞造成損害。
細(xì)胞計(jì)數(shù):細(xì)胞濃度以5×05/ml為宜。
培養(yǎng)細(xì)胞將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),將培養(yǎng)瓶放入375CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)或者24-48小時(shí)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。
公司其他銷量大產(chǎn)品信息:3080 無菌7.5%氯化鈉肉湯 5ml× 瓶/箱 用于金黃色葡萄球菌的均質(zhì)增菌
30805 無菌腦心浸出液肉湯(BHI) 5ml×0 支/盒 用于細(xì)菌的培養(yǎng)
3080 0%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯 5ml× 瓶/箱 金黃色葡萄球菌均質(zhì)增菌
300 動(dòng)力‐硝酸鹽培養(yǎng)基(A 法) 0ml×0 支/盒 用于細(xì)菌的動(dòng)力試驗(yàn)
0403 西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂斜面 5ml×0 支/盒 細(xì)菌檸檬酸鹽利用試驗(yàn)
370 綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基(PDP)斜面 0 支/盒 用于綠膿菌素測(cè)定
30 無菌4‐甲基傘形酮葡糖苷酸(MUG)培養(yǎng)基5ml×0 支/盒 用于大腸埃希氏菌檢驗(yàn)
30309 無菌四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基(TTB) 0ml×0 支/盒 用于沙門氏菌選擇性增菌GB 4789.—00 菌落總數(shù)測(cè)定
00 平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA) 50g/瓶 用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定
300 平板計(jì)數(shù)瓊脂平板(PCA) 90mm×0 個(gè)/包 用于細(xì)菌總數(shù)測(cè)定
00 磷酸鹽緩沖液(pH7.) 50g/瓶 用于樣品稀釋
300 無菌磷酸鹽緩沖液(pH7.) 5ml× 瓶/箱 用于樣品稀釋
3003 無菌磷酸鹽緩沖液(pH7.) 9ml×0 支/盒 用于樣品稀釋
3004 無菌生理鹽水 5ml× 瓶/箱 用于樣品稀釋
3005 無菌生理鹽水 9ml×0 支/盒 用于樣品稀釋GB 4789.3—00 大腸菌群計(jì)數(shù)

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