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杭州賽析科技有限公司銷售部作者
GE-200液相色譜儀在飼料中*的含量測定應(yīng)用
本標(biāo)準(zhǔn)適用于混合飼料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料中*的測定。本標(biāo)準(zhǔn)測定量限（LOQ）為每千克飼料中*2mg。
GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)用水規(guī)則和實(shí)驗(yàn)方法
儀器設(shè)備
GE-200二元高壓液相色譜儀，配梯度洗脫SCL-501系統(tǒng)控制器，GE-200液相色譜儀，N2010色譜工作站
色譜柱：Vertex 苯基柱4.6*250,5um
分析天平：感量0.0001g
天平：感量0.01g
振蕩器
玻璃具塞三角瓶：250ml
微孔濾膜：孔徑0.45um
試劑和溶液
水應(yīng)符合GB/T 6682三級(jí)水的規(guī)定
乙腈：色譜純，磷酸：85%，二丁胺，磷酸二氫鉀，*
1mol/L磷酸二丁胺緩沖液（DBAP）：在700ml水中加入168ml二丁胺，然后緩慢加入約70ml磷酸，震蕩使二丁胺溶解，冷卻至室溫。調(diào)節(jié)PH至2.5-5.6（以每次1-2ml的速度加入18ml磷酸）。轉(zhuǎn)移至量瓶中，加水至1000Ml,過濾，備用。
PH6.0磷酸緩沖液：取136g磷酸二氫鉀、69g*至900ml水中，用磷酸調(diào)節(jié)PH至6.0±0.2，轉(zhuǎn)移至量瓶中，加水至1000ml
提取液：取200ml乙腈、25mlDBAP,25ml磷酸緩沖液，加水至1000ml
流動(dòng)相A：乙腈
流動(dòng)相B：PH2.4-3.0的水（用磷酸調(diào)節(jié)、過濾）
流動(dòng)相C：0.02ml/L DBAP溶液。取20ml 1mol/L DBAP溶液，加水至1000ml，過濾即得
*標(biāo)準(zhǔn)溶液：將*對(duì)照品在在60℃減壓干燥3H，稱取400mg（到0.0001g），置于100mL棕色容量瓶中，用乙腈溶液、定容，配置成4000ug/ml的貯備液，避光保存。
*標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確吸取6.25ml標(biāo)準(zhǔn)貯備液于50ml棕色容量瓶中，用提取液稀釋、定容、賠償成濃度500ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)中間液。
*標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)中間液于棕色容量瓶中，用提取液稀釋、定容至濃度為5、20、40、60、80ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液
試樣制備
取有代表性的樣品至少500g，用四分法縮減至約200g，粉碎通過1mm孔徑篩，混勻，貯于磨口瓶中備用
分析步奏
稱取試樣2g-10g（至0.01g）于玻璃具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加入100ml提取液，振蕩器上震蕩60Min（震蕩速度200r/min）。用濾紙過濾，棄初濾液，收集部分濾液，用微孔濾膜過濾，濾液供液相色譜分析。
HPLC色譜條件
色譜柱：Vertex 苯基柱4.6*250,5um
檢測波長：280nm
流動(dòng)相流速：1.5ml/min
進(jìn)樣體積：20uL
流動(dòng)相：A、B、C，梯度見下表：
時(shí)間（min） A% B% C%
0.0 50 50 0
3.0 50 50 0
4.0 15 85 0
5.0 15 0 85
25.0 25 0 75
25.1 50 50 0
30.0 50 50 0
定量測定
測定標(biāo)準(zhǔn)工作液和試樣溶液中*峰面積的響應(yīng)值，用單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)法定量
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