一、細胞基本屬性

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

注意事項 1）該細胞并不形成一致的單層，而是形成集落。（2）該細胞會使培養(yǎng)基快速變酸，且生長緩慢，故傳代后 48 小時內不應擾動；（3）普通TC處理的培養(yǎng)瓶或皿不能使細胞很好的貼壁，培養(yǎng)難度較高，需使用 Corning 的 cellbind 細胞培養(yǎng)瓶（貨號是 3289），或者使用多聚-L-賴氨酸溶液（貨號 PB180523）包被過的培養(yǎng)皿； （4）在細胞運輸途中，多數(shù)細胞會從培養(yǎng)瓶底分離，大片懸浮在培養(yǎng)基中，按照收貨注意事項處理即可恢復正常。

背景描述 人前列腺癌細胞LNCaP clone FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結針刺活檢中分離，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉移。LNCaP clone FGC細胞對5-α-二氫睪酮(生長調節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應。LNCaP clone FGC細胞并不形成一致的單層，而是形成集落，在傳代時可以用滴管反復吹吸打碎。LNCaP clone FGC細胞僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。LNCaP clone FGC細胞生長極其緩慢，傳代后48小時內不應擾動。當培養(yǎng)瓶封包后，多數(shù)LNCaP clone FGC細胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。收到后，在通常培養(yǎng)單層細胞的條件下培養(yǎng)24-48小時，以使細胞再貼壁。此后，可以換上新鮮培養(yǎng)液。如果需要，培養(yǎng)瓶內容物可以收集，300g離心15分鐘，以10毫升培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個單獨的培養(yǎng)瓶中。

年齡（性別） 男；50歲

組織來源 前列腺；左鎖骨淋巴結癌轉移灶

細胞類型 腫瘤細胞

腫瘤類型 前列腺癌細胞

生物安全等級 1

倍增時間 ~32-36 hours

致瘤性 Yes, in soft agar.Yes, the cells are tumorigenic in nude mice.

受體表達情況 androgen receptor, positive;estrogen receptor, positive

基因表達情況 human prostatic acid phosphatase; prostate specific antigen

保藏機構 ATCC; CRL-1740 BCRC; 60088 BCRJ; 0149 ECACC; 89110211

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

b、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

c、棄上清，沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

d、待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

b、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

c、用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

d、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

三、培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

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