瘧疾快速診斷試劑卡說明書
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【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）
英文名稱：BinaxNOW Malaria Test
【包裝規(guī)格】25人份/盒。
該試劑擁有美國FDA認證、歐洲CE認證、中國進口科研證，是的瘧疾診斷試劑之一。
此外廣州健侖生物科技有公司是*的診斷試劑供應，健侖生物*為中國石化集團、中國石油集團、中國有色金屬集團、*駐蘇丹維和*、*駐剛果金維和*等十多大型跨國集團公司在非洲地區(qū)工作人員提供瘧疾體檢試劑卡。
【預期用途】
瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）是體外免疫層析試驗，用于定性檢測具有瘧疾癥狀和體征人群EDTA抗凝靜脈血或毛細血管血中的惡性瘧原蟲抗原和間日瘧原蟲抗原，可對惡性瘧原蟲、間日瘧原蟲做出輔助診斷，并可對惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲做出鑒別診斷。
該試驗不用于無癥狀人群的篩查。
【檢驗原理】
瘧原蟲抗原檢測試劑盒（膠體金法）使用的是薄膜免疫層析技術(shù)，該技術(shù)用單克隆抗體檢測靜脈血和末梢血中的惡性瘧原蟲抗原和間日瘧原蟲抗原，這兩種抗體與對照抗體固定到膜支持物上形成三條不同的線，膜支持物與樣品墊相連，結(jié)合有可視粒子的對照抗體和抗瘧原蟲抗體浸滲在樣品墊上，組成檢測條。檢測條位于一塊書形鉸鏈狀的檢測卡中，與沖洗墊和吸收墊一道參與檢測板閉合后薄膜的清洗。
檢測時，將全血加到樣品墊上，標本中存在的瘧原蟲抗原與抗瘧原蟲抗體結(jié)合物結(jié)合。將A試劑液加到檢測條的底部，使抗原結(jié)合物復合物沿檢測條流動，在固定抗體處被捕獲，形成檢測線，固定的對照抗體捕獲對照結(jié)合物，形成對照線。一旦血標本流過檢測條，就將檢測板閉合，使加到?jīng)_洗墊中的A試劑把檢測條上多余的血液沖去。
檢驗結(jié)果可用紫紅色線的存在與否來解釋。15分鐘讀數(shù)時，陽性結(jié)果將包括一條檢測線（或兩條檢測線）和一條對照線，陰性結(jié)果只產(chǎn)生一條對照線，陰性表明標本中未檢出瘧原蟲抗原。如果不出現(xiàn)對照線，不管檢測線出現(xiàn)與否，結(jié)果都為無效。
【主要組成成份】
1. 檢測卡
檢測卡 | 組分 |
捕獲線（T1）抗體 | HRPⅡ捕獲抗體 |
捕獲線（T1）結(jié)合物 | 金標記的抗HRPⅡ抗體 |
捕獲線（T2）抗體 | 抗醛縮酶IgG |
捕獲線（T2）結(jié)合物 | 金標記的抗醛縮酶 |
質(zhì)控線捕獲抗體 | 雞IgY |
質(zhì)控線結(jié)合物 | 結(jié)合金顆粒的驢抗雞IgY |
2．A試劑：含去污劑和疊氮鈉的Tris緩沖液。
3．毛細管：EDTA抗凝毛細管，用于將末梢全血加入到檢測卡中。
自備材料
*、滅菌拭子或棉球、時鐘、秒表或跑表
注：加樣時，要使用能加樣15μl體積的經(jīng)過校準的加樣器
【儲存條件及有效期】
試劑盒在2-37℃貯藏。
試劑有效期為自生產(chǎn)之日起24個月。
試劑在滿足貯藏條件的情況下可穩(wěn)定使用至效期（效期標注在外包裝和試劑盒內(nèi)）結(jié)束。
【樣本要求】
EDTA抗凝的新鮮全血。手指血要立即測試，靜脈血可于2-30℃保存3天，但測試前須平衡至室溫（15-30℃），并*混勻。
瘧疾快速檢測卡【檢驗方法】
瘧疾快速檢測卡【檢驗結(jié)果的解釋】
瘧疾快速檢測卡有效試驗結(jié)果
對照線（C）會出現(xiàn)在所有有效試驗中，當存在對照線時，試驗結(jié)果可如下解釋。注：出現(xiàn)的任意檢測線，即使顏色非常淺淡，也解釋為陽性結(jié)果。
試驗 | 結(jié)果 | 種類 / 解釋 |
T1 陽性 | 惡性瘧原蟲（P.f.） | |
T2 陽性 |
| 間日瘧原蟲（P.v.） |
T1 + T2 陽性 |
| 惡性瘧原蟲結(jié)果陽性 （P.f.），在有些病例同時出現(xiàn)T1線和T2線可能表明存在惡性瘧原蟲和間日瘧原蟲的混合感染。 |
無T1 和T2線 |
| 陰性結(jié)果 （未檢測到瘧原蟲抗原） |
無效和/或無法解釋的試驗結(jié)果
如果對照線不出現(xiàn)，不管檢測線出現(xiàn)與否結(jié)果都是無效的。
15分鐘時，如果背景色妨礙讀數(shù)，結(jié)果無法解釋。標本或A試劑的加入方法不正確可導致試驗無效或試驗結(jié)果無法解釋。用新檢測板重新檢測前，請查閱檢測步驟部分和預防措施＃5。如果問題仍無法解決，請與技術(shù)部門。
【產(chǎn)品性能指標】
預期值
瘧疾是一種嚴重的寄生蟲病，是熱帶亞熱帶地區(qū)危害健康的主要因素之一。瘧原蟲的陽性檢出率受多種因素影響，包括標本采集方法、檢驗手段、地理位置和疾病在特定區(qū)域的流行性。惡性瘧原蟲感染被認為是zui兇險的，而間日瘧原蟲很少有致命性。
2001年，在瘧疾地方流行區(qū)域進行了一項臨床研究。在有癥狀病人中，惡性瘧疾（用顯微鏡檢查進行了確定）平均占14％，間日瘧疾平均占29％，惡性瘧與間日瘧的混合感染占的比例非常低。
2005－2006年在美國東部進行了一項多層研究，從發(fā)熱和有發(fā)熱史的住院和門診病人（這些病人住在很少發(fā)生瘧疾的地區(qū)，被看作是瘧原蟲陰性病人）中收集了217份全血標本，用BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒進行檢測，結(jié)果216（99.5%）人陰性。
操作特性
臨床標本特性－BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒敏感性和特異性－地方流行人群：
2001年在美國國外瘧原蟲流行地區(qū)進行了一個多中心前瞻性研究，研究中將BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒與吉姆薩染色顯微鏡技術(shù)進行了比較。從帶有瘧原蟲樣癥狀的病人中采集了4,122份全血標本用BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒評價。由于瘧原蟲的無性形式（非配子體）表示有感染，因此，顯微鏡檢查只有檢查到瘧原蟲的無性形式才能視為陽性。
測試人群中44%的人（1,796/4,122）用顯微鏡檢查為瘧疾陽性，其中有557個病人為惡性瘧、1,187個人為間日瘧，34個人為惡性瘧/間日瘧混合感染。59％的人為男性，41％的人為女性。19％的人為兒童（＜18歲），81％的人為成人（＞18歲）。BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對單種瘧原蟲和惡性瘧/間日瘧混合感染的性能概述如下。
BinaNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒的試驗性能在病人的年齡和性別方面沒有差異，BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對惡性瘧的特異性在5％接受過抗瘧藥物治療的病人中（89.4%）較之未治療的病人（94.4%）有少許下降，但無統(tǒng)計學差異。
在整個研究人群中，BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對低紅細胞壓積和高紅細胞壓積樣本的試驗性能是等同的。
對惡性瘧原蟲感染的檢測
BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒和顯微鏡檢查對惡性瘧原蟲的敏感性和特異性情況如下所示。對敏感性的評價基于顯微鏡檢查中觀察到的寄生物血癥水平（每微升的寄生蟲量）。
BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒與顯微鏡檢查在惡性瘧原蟲敏感性和特異性方面的比較
惡性瘧的敏感性
寄生物血癥水平 | 敏感性％ | 95％可信區(qū)間 |
＞5000 | 99．7％（326/327） | 98－100％ |
1000－5000 | 99．2％（126/127） | 96—100％ |
500－1000 | 92．6％（25/27） | 76—99％ |
100－500 | 89．2％（33/37） | 75—97％ |
0－100 | 53．9％（21/39） | 37—70％ |
總計 | 95．3％（531/557） | 93—97％ |
惡性瘧的特異性
特異性％ | 95％可信區(qū)間 |
94．2％（3297/3500） | 93—95％ |
間日瘧原蟲感染的檢測
BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒和顯微鏡檢查對間日瘧原蟲的敏感性和特異性情況如下所示。對敏感性的評價基于顯微鏡檢查中觀察到的寄生物血癥水平（每微升的寄生蟲量）。有68份標本顯微鏡檢查僅間日瘧原蟲陽性，用BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒檢查卻出現(xiàn)了兩條檢測線。如果這些結(jié)果也記錄在陽性之列，BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對間日瘧原蟲測定的總敏感性從68.9%提高到74.6%（886/1,187）。
與顯微鏡法相比，BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對間日瘧原蟲的敏感性和特異性
對間日瘧原蟲的敏感性
寄生物血癥水平 | 敏感性％ | 95％可信區(qū)間 |
＞5000 | 93.5％（462/494） | 91－96％ |
1000－5000 | 81.0％（277/342） | 76—85％ |
500－1000 | 47.4％（37/78） | 36—59％ |
100－500 | 23.6％（34/144） | 17—31％ |
0－100 | 6.2％（8/129） | 3—12％ |
總計 | 68.9％（818/1187） | 66—72％ |
對間日瘧原蟲的特異性
特異性％ | 95％可信區(qū)間 |
99.8％（2863/2870） | 99—100％ |
惡性瘧和間日瘧的檢測限：
在上述研究中，經(jīng)確定BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對惡性瘧的臨床檢測限（LOD）（定義為95％的檢測次數(shù)產(chǎn)生陽性結(jié)果的寄生蟲血癥水平）為1001－1500個寄生蟲/微升，對間日瘧的檢出限為5001－5500個寄生蟲/微升。
樣品的臨床性能－BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒在流行人群中對指血和靜脈血的敏感性和特異性：
2003年在美國國外瘧疾流行區(qū)域進行了一項前瞻性研究，該研究用靜脈血和指血對BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒的性能與吉姆薩顯微鏡法進行了比較。BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒評估的全血采自787位有瘧疾癥狀的病人的靜脈和指尖。由于無性體（非配子體）表示有感染，顯微鏡檢查只有查到無性體方可視為陽性。
用BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒和顯微鏡法對782份靜脈血標本和784份指尖血標本進行分析，BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒相對顯微鏡法對惡性瘧和間日瘧的敏感性和特異性如下：
與顯微鏡法相比，BinaxNOW®瘧原蟲抗原檢測試劑盒對靜脈血和指尖血中惡性瘧和間日瘧的敏感性和特異性
靜脈血標本 | ||||
敏感性％ | 95％可信區(qū)間 | 特異性％ | 95％可信區(qū)間 | |
惡性瘧 | 100％（81/81） | 96-* | 94.7%（664/701） | 93-96% |
間日瘧 | 81.6%（102/125） | 74-87% | 99.7%（655/657） | 99-* |
【注意事項】
1． 用于體外診斷。
2． 檢測前將檢測卡密封保存。
3． 不要使用超過有效期的試劑盒。
4． 不要將不同批號試劑混合使用。
5． 為了取得*標本流量，優(yōu)化試驗過程，加標本和A試劑時要照試驗步驟操作。向檢測卡上加A試劑時要注意下列問題：
a. 將A試劑瓶垂直置于檢測卡墊的上方1至2.5厘米處，慢速自由滴入試劑，以使加到?jīng)_洗墊和吸收墊上的試劑量合乎需要。
b. 在將A試劑加到紫色標本墊正下方的白色墊上時，需待*滴試劑*被墊吸收后方可加第二滴，必要時可加入第三滴－見操作步驟3。
6． 如果用的是靜脈血，要輕扣試管或小瓶將標本混勻。吸樣前，將標本在加樣頭中來回吸排幾次。
7． 如果用的是末梢血，要使用試劑盒中提供的微量毛細管加樣。
8． 病人標本和檢測卡要視為傳染性物質(zhì)，按血液傳染源的預防措施處理，不要再次開封和使用檢測卡。
9． 空氣循環(huán)過度（即：空調(diào)、風扇等）可減慢標本的流速，建議不要在流速過大的環(huán)境中測試標本。
10. 解釋結(jié)果時，使用明亮未過濾的光源。
11. 所有毛細管和吸頭都是一次性的，不要多份標本合用。加樣設備、容器或試劑的污染可導致結(jié)果不準確。
12. A試劑用疊氮鈉做防腐劑，疊氮鈉有毒，應小心處理，不要誤吸或與皮膚接觸。它可與鉛或銅反應形成爆炸性的金屬氮化物。接觸后要用大量清水沖洗。
【參考方獻】
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9. Collins, W.E., and G. M. Jeffery. Plasmodium ovale: Parasite and Disease. Clinical Microbiology Reviews, July 2005; 18:570-581.
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