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上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間：2017-06-01 09:25:50瀏覽次數(shù)：385
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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商，提供水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞；WB-S4的報(bào)價(jià)，咨詢，稱技術(shù)服務(wù)，咨詢選購(gòu)。
細(xì)胞名稱 水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞；WB-S4
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一雄性河川型水牛的耳部皮膚組織，2010年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，即對(duì)培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。
2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH：細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動(dòng)物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。
4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
ABCD4 cDNA Rat 大鼠 ABCD4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RBM47 cDNA Rat 大鼠 RBM47 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NCAPH2 cDNA Rat 大鼠 NCAPH2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SPCS2 cDNA Rat 大鼠 SPCS2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SLC25A13 cDNA Rat 大鼠 SLC25A13 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HBA2 cDNA Rat 大鼠 HBA2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CDIP1 cDNA Rat 大鼠 CDIP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
UMPS cDNA Rat 大鼠 UMPS 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CCNB1 cDNA Rat 大鼠 CCNB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
FAM45A cDNA Rat 大鼠 FAM45A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RGD1306063 cDNA Rat 大鼠 RGD1306063 基因全長(zhǎng)ORF克隆
MYOT cDNA Rat 大鼠 MYOT 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PTBP1 cDNA Rat 大鼠 PTBP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
YWHAZ cDNA Rat 大鼠 YWHAZ 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CPXM1 cDNA Rat 大鼠 CPXM1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NCSTN cDNA Rat 大鼠 NCSTN 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SC5D cDNA Rat 大鼠 SC5D 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NUCB1 cDNA Rat 大鼠 NUCB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CAPN6 cDNA Rat 大鼠 CAPN6 基因全長(zhǎng)ORF克隆
DDX18 cDNA Rat 大鼠 DDX18 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HSP90AB1 cDNA Rat 大鼠 HSP90AB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SLC35A4 cDNA Rat 大鼠 SLC35A4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
NARFL cDNA Rat 大鼠 NARFL 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PITPNB cDNA Rat 大鼠 PITPNB 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ETFDH cDNA Rat 大鼠 ETFDH 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ANGPTL2 cDNA Rat 大鼠 ANGPTL2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
RBM41 cDNA Rat 大鼠 RBM41 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SRP72 cDNA Rat 大鼠 SRP72 基因全長(zhǎng)ORF克隆
MORF4L1 cDNA Rat 大鼠 MORF4L1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PPME1 cDNA Rat 大鼠 PPME1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ZWINT cDNA Rat 大鼠 ZWINT 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SERPINA11 cDNA Rat 大鼠 SERPINA11 基因全長(zhǎng)ORF克隆
GDPD2 cDNA Rat 大鼠 GDPD2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HPX cDNA Rat 大鼠 HPX 基因全長(zhǎng)ORF克隆
YIF1A cDNA Rat 大鼠 YIF1A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HSD17B2 cDNA Rat 大鼠 HSD17B2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
LMAN2 cDNA Rat 大鼠 LMAN2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
EIF3G cDNA Rat 大鼠 EIF3G 基因全長(zhǎng)ORF克隆
TCEAL7 cDNA Rat 大鼠 TCEAL7 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CHMP1B cDNA Rat 大鼠 CHMP1B 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ARHGAP1 cDNA Rat 大鼠 ARHGAP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CFH cDNA Rat 大鼠 CFH 基因全長(zhǎng)ORF克隆
SSR3 cDNA Rat 大鼠 SSR3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PPP2R1A cDNA Rat 大鼠 PPP2R1A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HSPD1 cDNA Rat 大鼠 HSPD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
